[發明專利]大腸桿菌外膜蛋白TolC核酸適配體的序列及用途

有效

• 申請號: 201410333237.1
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN104087590A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 陳伶利;葛金文;李杰
• 申請（專利權）人: 湖南中醫藥大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/68;A61K48/00;A61P31/04
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

1.特異結合大腸桿菌外膜蛋白TolC的核酸適配體，所述核酸適配體如SEQ?ID?NO：10所示序列。

2.按權利要求1所述的適配體，其特征在于，所述大腸桿菌外膜蛋白TolC采用如下方法純化得到：

采用分子克隆技術，根據大腸桿菌外膜蛋白TolC的基因組序列設計特異引物，所述特異引物之上游引物Pa為5’-CGGGATCCATGAAGAAATTGCTCCCCATTCTT‐3’，其下游引物Pb為5’‐CCGCTCGAGGTTACGGAAAGGGTTATGACCGTT‐3’，以全長cDNA為模板，PCR擴增，得到目的基因經Bam?H?I和Xho?I雙酶切，同樣處理PET-30a質粒，再用T4連接酶連接制得含有TolC基因的重組質粒；重組質粒轉化感受態細胞BL21，從轉化的平板挑單克隆到液體培養基中培養，IPTG誘導表達，經固液分離，取沉淀經超聲粉碎，然后電泳；再采用柱層析純化所述大腸桿菌外膜蛋白TolC。

3.按權利要1或2所述的適配體，其特征在于，所述序列為人工合成的序列，或任何其他來源的同樣的序列。

4.一種權利要求1-3中任一項所述的適配體在制備大腸桿菌外排泵抑制劑中的應用。

5.一種權利要求1-3中任一項所述的適配體在制備檢測TolC蛋白的探針或靶點中的應用。

6.一種權利要求1所述的適配體在制備大腸桿菌外排泵抑制劑或制備檢測TolC蛋白的探針或靶點中的應用。