[發明專利]一種多重實時熒光定量PCR技術快速檢測人21號染色體數目的試劑盒

無效

• 申請號: 201410333071.3
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN104087672A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 孫雷;樊祖茜;龍駒
• 申請（專利權）人: 欽州市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司 45107
• 代理人: 唐智芳

技術領域

本發明涉及一種多重實時熒光定量PCR技術快速檢測人21號染色體數目的試劑盒，屬于分子生物學領域。

背景技術

唐氏綜合征(Down’s?syndrome)也稱為21-三體綜合征,是人類最常見的染色體數目異常引起的非整倍體疾病,新生兒發生率為1/600～1/800。患兒主要表現為嚴重的先天性智力障礙和各種器官先天性畸形,多數患者生活無法自理。目前,該病尚無有效的治療方法,因此,進行產前診斷防止患兒的出生是預防該類疾病發生的主要方法。長期以來,羊水細胞培養、染色體核型分析成為產前診斷的經典方法(Caspersson?T,Zech?L,Johansson?C,et?al.Identification?of?human?chromosomes?by?DNA-binding?fluorescent?agents[J].Chromosoma,1970,30(2):215-227.),但是，該方法存在費時(一般要兩周以上)、容易培養失敗以及不能檢測較小的染色體結構畸變等缺點。熒光原位雜交(FISH)技術應用于產前快速診斷，無需進行細胞培養，24小時內就可得出檢驗結果成為可能(Ho?SSY,Chua?C,Gole?L,et?al.Same-day?prenatal?diagnosis?of?common?chromosomal?aneuploidies?using?microfluidics-fluorescence?in?situ?hybridization[J].Prenatal?Diagnosis,2012,32(4):321-328.等)；但是由于該技術操作繁瑣并且要求具有良好的技術專業性，使得該技術不能大量的進行臨床標本的應用。因此，應該需要建立更加快速而有效的產前診斷方法來彌補以上方法的一些缺陷和不足。

隨著分子生物學的發展,目前已出現了幾種快速分子診斷非整倍體的方法。QF-PCR方法是目前應用最廣的一種方法，該方法能實現非整倍體的準確檢測(Atef?SH,Hafez?S,Helmy?S,et?al.QF-PCR?as?a?Rapid?Technique?for?Routine?Prenatal?Diagnosis?of?Fetal?Aneuploidies[J].Pediatric?Research,2011,70:412-412.)，該技術的主要缺點是診斷需要依靠多態性位點，而多態性位點可能在某一人群能較好的進行診斷，而因為種族的差異可能會出現在其它人群中出現無法進行診斷的情況(Mann?K,Donaghue?C,Fox?SP,et?al.Strategies?for?the?rapid?prenatal?diagnosis?of?chromosome?aneuploidy[J].Eur?J?Hum?Genet,2004,12:907-915.)；并且，其在PCR擴增后還需要毛細管電泳分析其片段片度，因此，儀器及試劑的費用也限制了該方法的廣泛應用。多重連接探針擴增(MLPA)技術最開始應用于基因拷貝數的變化，后來應用于非整倍體疾病的診斷(Slater?HR,Bruno?DL,Ren?H,et?al.Rapid,high?throughput?prenatal?detection?of?aneuploidy?using?a?novel?quantitative?method(MLPA)[J].Journal?of?medical?genetics,2003,40(12):907-912.)，由于該技術需要雜交過夜、連接以及產物的后續毛細管電泳分析等步驟，實驗相對繁瑣且后續分析昂貴費用影響了該技術的廣泛應用(Willis?AS,Veyver?I,Eng?CM.Multiplex?ligation‐dependent?probe?amplification(MLPA)and?prenatal?diagnosis[J].Prenat?Diagn,2012；32:315-320.)。