[發明專利]采用LAMP技術檢測牛無漿體方法有效
| 申請號： | 201410332786.7 | 申請日： | 2014-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN104152550A | 公開（公告）日： | 2014-11-19 |
| 發明（設計）人： | 寧長申;王金鴻;呂亞莉;菅復春;張龍現;王榮軍;張艷;張文靜;曹樹軒 | 申請（專利權）人： | 河南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 鄭州中原專利事務所有限公司 41109 | 代理人： | 張春;王曉麗 |
| 地址： | 450002 河南省鄭州市金*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 采用 lamp 技術 檢測 牛無漿體 方法 | ||
1.采用LAMP技術檢測牛無漿體方法，該檢測方法包括LAMP引物設計、LAMP?反應體系建立以及采用LAMP檢測方法，所述的?LAMP?檢測方法是采用特異性檢測、敏感性檢測和熒光可視化檢測，所述的LAMP引物設計利用Primer?Explorer?V4軟件針對牛無漿體16S?rRNA基因的6個位點設計4條LAMP引物，引物包括兩條外引物F3和B3、兩條內引物FIP和BIP，其中：?
F3：GGGCATGTAGGTGGTTTGG；
B3：GCGTGGACTACCAGGGTAT；
FIP：TCTCCCGGACTCCAGTCTGGTAAAGGTGAAATGCCAGGGC；
BIP：ATTAGGAGGAACACCAGTGGCGCACGCTTTCGCACCTCAG。
2.根據權利要求1所述的采用LAMP技術檢測牛無漿體方法，其特征在于：所述的LAMP?反應體系包括：
1）引物混合液：外引物為F3和B3各0.2?μmol/L，內引物為FIP和BIP各1.6?μmol/L，外內引物比為1：8；
2）反應混合液：0.8?mol/L?Betaine，8?mmol/L?MgSO4，1.4?mmol/L?dNTP?Mixture，8?U/25?μL?Bst?DNA?聚合酶；
3）2μl?DNA模版；
加滅菌雙蒸餾水至25?μL。
3.如權利要求2所述的采用LAMP技術檢測牛無漿體方法，其特征在于：所述LAMP?反應體系的反應條件，將引物引物混合液和反應混合液混合均勻后加入2?μL?DNA模版，在60-65℃保溫30-90min。
4.如權利要求3所述的采用LAMP技術檢測牛無漿體方法，其特征在于：所述LAMP?反應體系的反應條件，將引物引物混合液和反應混合液混合均勻后加入2?μL?DNA模版，在62℃保溫60min。
5.如權利要求1所述的采用LAMP技術檢測牛無漿體方法，其特征在于：所述的熒光可視化檢測采用SYBR?Green?I染料，在每個管蓋內側添加1μL稀釋10倍的SYRB?Green?I原液，合上管蓋，反應結束后，輕甩反應管，使染料與產物混合。
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