[發(fā)明專(zhuān)利]大腸桿菌外膜蛋白TolC核酸適配體的序列及用途有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410332602.7 | 申請(qǐng)日： | 2013-02-28 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN104087589A | 公開(kāi)（公告）日： | 2014-10-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李杰;陳伶利;葛金文 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 湖南中醫(yī)藥大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/115 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/115;G01N33/68;A61K31/7088;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京弘權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11363 | 代理人： | 逯長(zhǎng)明;許偉群 |
| 地址： | 410208 湖南省*** | 國(guó)省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 大腸桿菌 膜蛋白 tolc 核酸 適配體 序列 用途 | ||
1.特異結(jié)合大腸桿菌外膜蛋白TolC的核酸適配體，所述核酸適配體如SEQ?ID?NO：6所示序列。
2.按權(quán)利要求1所述的適配體，其特征在于，所述大腸桿菌外膜蛋白TolC采用如下方法純化得到：
采用分子克隆技術(shù)，根據(jù)大腸桿菌外膜蛋白TolC的基因組序列設(shè)計(jì)特異引物，所述特異引物之上游引物Pa為5’-CGGGATCCATGAAGAAATTGCTCCCCATTCTT‐3’，其下游引物Pb為5’‐CCGCTCGAGGTTACGGAAAGGGTTATGACCGTT‐3’，以全長(zhǎng)cDNA為模板，PCR擴(kuò)增，得到目的基因經(jīng)Bam?H?I和Xho?I雙酶切，同樣處理PET-30a質(zhì)粒，再用T4連接酶連接制得含有TolC基因的重組質(zhì)粒；重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞BL21，從轉(zhuǎn)化的平板挑單克隆到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)固液分離，取沉淀經(jīng)超聲粉碎，然后電泳；再采用柱層析純化所述大腸桿菌外膜蛋白TolC。
3.按權(quán)利要1或2所述的適配體，其特征在于，所述序列為人工合成的序列，或任何其他來(lái)源的同樣的序列。
4.一種權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的適配體在制備大腸桿菌外排泵抑制劑中的應(yīng)用。
5.一種權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的適配體在制備檢測(cè)TolC蛋白的探針或靶點(diǎn)中的應(yīng)用。
6.一種權(quán)利要求1所述的適配體在制備大腸桿菌外排泵抑制劑或制備檢測(cè)TolC蛋白的探針或靶點(diǎn)中的應(yīng)用。
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