[發(fā)明專利]冠心病易感位點(diǎn)rs1801133的檢測(cè)方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410331666.5
• 申請(qǐng)日: 2014-07-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104059990A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?zhí)熘?/a>;黃迅威;沈玲宇;邵敏華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 光瀚健康咨詢管理(上海)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種冠心病易感位點(diǎn)的檢測(cè)方法，其特征在于：包括步驟：

(1)提取樣品的基因組DNA，擴(kuò)增樣品的亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因外顯子中包含rs1801133位點(diǎn)的區(qū)域，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和

(2)使用高分辨熔解曲線(high-resolution melt，HRM)分析技術(shù)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)rs1801133的基因型。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：MTHFR基因的rs1801133位點(diǎn)的基因型帶有TT時(shí)，該MTHFR基因所屬樣品的測(cè)試者對(duì)于冠心病的易感性高于基因型沒(méi)有TT的測(cè)試者。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：使用特異性引物擴(kuò)增樣品的MTHFR基因中包含rs1801133位點(diǎn)的區(qū)域，該特異性引物是指針對(duì)MTHFR基因上rs1801133號(hào)SNP位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能特異性擴(kuò)增出包含上述SNP位點(diǎn)的DNA片段的引物對(duì)。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述特異性引物具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：使用HRM分析技術(shù)直接檢測(cè)擴(kuò)增后包含上述SNP位點(diǎn)的DNA片段的引物對(duì)的基因型。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：將擴(kuò)增后包含上述SNP位點(diǎn)的DNA片段的引物對(duì)轉(zhuǎn)移至分析裝置，然后使用HRM分析技術(shù)對(duì)該引物對(duì)的基因型進(jìn)行分析。

7.一種用于檢測(cè)冠心病易感位點(diǎn)的試劑盒，其特征在于：對(duì)MTHFR基因中包含rs1801133位點(diǎn)的區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增及HRM技術(shù)分析。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括特異性擴(kuò)增MTHFR基因中包含rs1801133位點(diǎn)的區(qū)域的特異性引物。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述特異性引物具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于：試劑盒的組分及含量包括5ul2X LightCycler480High Resolution Melting Master Mix、1.2ul25mM MgCl2溶液、1ul2μM Primer Mix、1ul5ng/μl左右DNA、1.8ul H2O、具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的特異性引物。