[發(fā)明專利]一種利用中華鱘凍精進(jìn)行濕法授精的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410330452.6
• 申請(qǐng)日: 2014-07-11
• 公開（公告）號(hào): CN104145854A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 舒德斌;杜合軍;張建明;郭柏福;劉雪清;劉娟娟;高勇;陳磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)長(zhǎng)江三峽集團(tuán)公司
• 主分類號(hào): A01K61/00
• 分類號(hào): A01K61/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務(wù)所 42103
• 代理人: 成鋼

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中華鱘繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用中華鱘凍精進(jìn)行授精的方法。?

背景技術(shù)

精液超低溫冷凍保存技術(shù)在眾多的物種保護(hù)措施中具有重要的科研和應(yīng)用價(jià)值。國(guó)內(nèi)外相關(guān)學(xué)者對(duì)魚類精子超低溫冷凍保存進(jìn)行了研究，并取得了很大的進(jìn)展。有些魚類凍精授精的受精率可達(dá)到鮮精受精率的水平。?

中華鱘是一種大型瀕危水生動(dòng)物，其性成熟和性周期長(zhǎng)，雌性成熟年齡一般在12年以上、雄性在8年以上。中華鱘精液超低溫冷凍保存技術(shù)的研究應(yīng)用對(duì)解決中華鱘人工增殖過程中遇到的雄魚數(shù)量不足和雌雄親魚性腺發(fā)育不同步等問題具有重要的意義。?

在中華鱘精液超低溫冷凍保存技術(shù)研究方面，柳凌對(duì)中華鱘精液超低溫冷凍保存技術(shù)進(jìn)行了研究；2005年中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所與捷克南波希米亞魚類養(yǎng)殖和水生生物研究所國(guó)際鱘類精液冷凍保存專家合作，開展了中華鱘精子超低溫冷凍保存試驗(yàn)，并進(jìn)行了解凍授精試驗(yàn)，獲得2.22-6.98％受精率。2009年中國(guó)長(zhǎng)江三峽集團(tuán)公司中華鱘研究所在中華鱘全人工繁殖首次凍精授精實(shí)驗(yàn)中，利用保存53d的子一代中華鱘凍精，進(jìn)行凍精授精，獲得5％受精率。我們?cè)谄渌\魚凍精授精比較試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，中華鱘凍精授精條件要比其它鱘魚授精條件苛刻。?

現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)：?

1、目前中華鱘凍精授精方式采用的是干法授精，即將卵和凍精加在一起混勻后用激活液激活授精。其凍精中的抗凍稀釋液對(duì)精子和卵子授精時(shí)的生理生化環(huán)境產(chǎn)生不利影響。?

2、中華鱘凍精授精時(shí)一般采用專門配制的激活液。一是在凍精人工授精過程，要求復(fù)雜，操作不便；二是激活液本身雖然可以激發(fā)精子快速運(yùn)動(dòng)，但并未有研究表明可以提高卵子的受精能力，可能精子激活液對(duì)卵子受精的生理生化環(huán)境有潛在的不利影響。?

3、上述相關(guān)報(bào)道的凍精受精率低。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)以上問題，提供一種利用中華鱘凍精進(jìn)行授精的方法，可有效地提高中華鱘凍精受精率。?

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，提供一種利用中華鱘凍精進(jìn)行授精的方法，具體步驟為：?

1)待卵子產(chǎn)出時(shí)，解凍中華鱘凍精，在干燥光滑的容器內(nèi)一側(cè)放入量取的卵子，另一側(cè)加入需要的精子，精子與卵子的體積比為1:10-20，精子與卵子不直接接觸；?

2)授精向容器中加入卵子體積量2-3倍的水，充分?jǐn)嚢?0-30s，用水激活精子并使精子和卵子充分接觸進(jìn)行授精；?

3)攪拌完成后，倒掉上清液，再次加入卵子體積的1：10-20的精子和卵子體積量2-3倍的水進(jìn)行再次授精，重復(fù)授精操作1-2次；?

4)用水沖洗除去多余的精子，用滑石粉脫粘60min后轉(zhuǎn)入孵化器孵化，完成授精過程。?

解凍中華鱘凍精時(shí)，將凍精從液氮中取出，投入38-40℃水浴鍋中進(jìn)行水浴90-120s即可。解凍時(shí)間控制在90-120s以內(nèi)，短時(shí)間解凍，一方面可減少解凍時(shí)的冷凍損傷；另一方面精子解凍復(fù)蘇后其活力會(huì)因時(shí)間延長(zhǎng)而降低。故一般等卵子產(chǎn)出后或者在產(chǎn)卵之時(shí)，即將凍精直接從液氮中取出解凍。?

所述授精操作在2min內(nèi)完成，因?yàn)閮鼍诩せ?min后受精能力大大降低，時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)造成凍精的抗凍稀釋液對(duì)精子及卵子受精能力的不利影響。?

所述中華鱘凍精解凍后采用顯微鏡檢查精子活力。檢測(cè)時(shí)，用一次性注射器針頭沾取少量精液于在載玻片上的曝氣水滴中，用針頭攪散，立即在顯微鏡下觀察精子的運(yùn)動(dòng)情況。精子活力判斷標(biāo)準(zhǔn)為視野內(nèi)快速活動(dòng)精子占精子總數(shù)的百分比。活力檢測(cè)由同一個(gè)人完成，每樣重復(fù)3次。活力檢測(cè)目的在于檢測(cè)凍精活力情況，以指導(dǎo)在凍精授精時(shí)選取優(yōu)質(zhì)的凍精、凍精的用量以及授精的次數(shù)。?

所述干燥光滑的容器為搪瓷盆或塑料盆；采用光滑的容器方便精子和卵子的運(yùn)動(dòng)及混合接觸。?

本發(fā)明中涉及的中華鱘凍精授精條件相比其它鱘魚凍精授精條件苛刻，在中華鱘凍精授精過程中，盡量減少中華鱘凍精抗凍稀釋液和精子激活液對(duì)精子、卵子受精能力的不利影響，以實(shí)現(xiàn)提高中華鱘凍精授精的受精率。?

本發(fā)明的有益效果：?

1、濕法授精可減少凍精抗凍稀釋液在授精過程中對(duì)精子及卵子受精能力的不利影響。?

2、用水激活避免了使用其它精子激活液在授精過程中對(duì)精子及卵子受精能力的不利?影響；不需配制專門的凍精激活液，操作相對(duì)簡(jiǎn)便。?