[發明專利]一種納米鐵免疫檢測器

在審

• 申請號: 201410330438.6
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN104090096A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 金麗;曹雪玲;婁大偉
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明提出的是設計研發一種新型納米鐵免疫檢測器。

背景技術

在將磁性復合微粒用于免疫學研究領域中時，科學家形象地將其稱為免疫磁性微球(Immunomagnetic?microspheres，IMMS)，或稱免疫磁珠(Immunomagnetic，bedas，IMB)。由于磁性微粒超強的富集和快速的分離能力、較高的比表面積以及表面結合抗體對相應抗原的特異性識別作用，可以用來進行抗體/抗原分離和EUSA檢測，與傳統的酶標法(EUAs)相比，具有更高的檢測靈敏度，操作更為簡單；還可以對小分子藥物進行免疫檢測，結合免疫熒光、光纖傳感、電磁分離、流式細胞儀、流動注射等技術，實現在線快速檢測。

本發明提出設計研發一種新型納米鐵免疫檢測器用于進行免疫分析。研發階段包括：1、磁性熒光微球的合成；2、磁性熒光微球固定抗體；3、檢測器樣品池的研發；4、檢測器的組裝及調試；?5、檢測器性能論證。

本發明利用磁性熒光微球上固定抗體，利用抗體一抗原特異性結合特點，固定抗體的磁性熒光微球可與異硫氰酸熒光素標記的抗原結合，而待測物中抗原的濃度與熒光強度之間具有良好的線性關系，依據于此建立檢測抗原含量的新方法，進一步研發為新型檢測器。研發的檢測器只需檢測到量子點熒光強度的變化，并轉換為數字信號，與熒光分光光度計相比，構造簡單、成本低廉，且具有操作方便、靈敏度高、檢測范圍寬和循環利用等優點，可以用于免疫檢測和細胞分離等方面。

發明內容

1、量子點的合成。

2、磁性熒光微球的合成及其固定抗體。

3、檢測器組裝及調試。?

附圖說明

圖1為本發明儀器的結構圖即檢測器結構示意圖，其中：1、光源，2、樣品池，3、電感磁圈，4、CCD，5、顯示屏，6、廢液缸，7、進樣瓶，8、樣品池進口閥門，9、樣品池出口閥門，10、蠕動泵，11、光源開關，12、電感磁圈開關。圖2為示例一的熒光光譜圖。

具體實施方式

1、量子點的合成

首先在2?mL水溶液中，將適量硼氫化鈉與2.9?mg碲粉混合反應制得碲氫化鈉的溶液1；在三口瓶中加入100?mL水，加入氯化鎘并調節pH＝11.4，在100?μL巰基丙酸穩定劑存在條件下，將新鮮制得的溶液1添加到此溶液中，加熱，常溫下，以羅丹明6G為對照，測得所合成量子點的量子效率在～25％左右。

2、磁性熒光微球的合成及固定抗體

1）稱取一定量的氯化鐵置入小燒杯，量取21?ml無水乙醇和9?ml蒸餾水后放入燒杯，攪拌至完全溶解，轉移至100?ml三口燒瓶中；

2）在小氣流氮氣氛圍并且劇烈機械攪拌的情況下保持15?min；

3）稱取一定量的硼氫化鈉，置入2?ml蒸餾水后溶解密封，用注射器緩慢加入三口燒瓶中；

4）用1?ml移液管吸取2?ml?TEOS和100μL氨水滴加至三口燒瓶中，氮氣保護并劇烈攪拌反應1?h；

5）加入1?ml所合成的CdTe量子點，加入2ml?APS繼續攪拌2小時；

6）反應完成后進行磁選分離，將懸浮液分離后，蒸餾水洗滌三次并重復磁選分離至清夜中無懸浮物。將固體轉移至烘干瓶中放入烘干箱設定溫度為70攝氏度待固體變為灰黑色；

7）將所得磁性熒光微球復溶于PBS緩沖溶液之中，加入抗體（例如羊抗兔IgG）孵育20分鐘，離心分離，去上清得固定抗體的磁性熒光微球。

3、檢測器主要部件

（1）、蠕動泵：將各種溶液以恒定的濃度、速率，定量引入流通池之中；

（2）、光源：提供激發波長為365?nm的激發光；

（3）、樣品池：為1?cm×1?cm×5?cm四面透光、中空的石英長方體，在長方體的左右上下各有一個孔，通過導管分別與蠕動泵和廢液缸相連接，進、出口分布設置開關閥門；

（4）、CCD：檢測量子點熒光強度變化，并將光學信號轉化為數字信號；

（5）、電腦：根據數字信號，結合所建立數據庫給出所檢測甲樣品的濃度。

4、檢測過程（抗體采用羊抗兔IgG、抗原采用FITC-兔抗羊IgG為模型）：