[發明專利]綿羊產羔數性狀相關的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201410327930.8
• 申請日: 2014-07-10
• 公開（公告）號: CN104099330A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 李發弟;王維民;潘香羽;劉世佳;翁秀秀;馬友記;唐德富;李沖
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發明涉及綿羊分子標記制備技術領域，具體涉及一種與綿羊產羔數性狀相關的分子標記及其應用，所述的分子標記從綿羊LHβ基因中克隆得到，它包括綿羊LHβ基因全基因組序列突變位點的檢測方法與應用。

背景技術

綿羊繁殖性狀是重要的經濟性狀，而產羔數又是主要的繁殖性狀之一。研究表明，綿羊繁殖性狀屬于低遺傳力的閾性狀，動物的產仔(羔)數是影響生產效益的一個重要因素，它受到基因控制，而且為加性-顯性基因作用模式(儲明星等.主基因及其在動物育種中的應用[J].農業生物技術學報,1995,3(4)：23-31.)。本發明所選目標性狀為產羔數，具有較容易度量的特點，為大樣本含量的試驗群體產羔記錄的采集提供了可行性。

隨著分子生物學技術的發展，越來越多的與綿羊產羔數性狀相關的候選基因和分子標記被發現，為標記輔助選擇(marker-assisted?selection，MAS)在育種中的應用積累了豐富的基因素材。目前，標記輔助選擇已作為常規選擇法的輔助手段而被廣泛應用，大大提高了產羔數性狀的改良速度。標記輔助選擇包括隨機引物擴增多態性(RAPD)標記、微衛星標記、PCR-RFLP標記、分子標記與QTL位點的連鎖分析方法等(趙西彪，AREG,ESR和FSHβ亞基基因與豬產仔數關系研究.揚州大學；2008.)。其中PCR-RFLP因具有檢測不受發育階段、性別等外部條件的影響的優點，所標記的變異數目不受限制，實用可靠而得到廣泛的應用。

促黃體素是腺垂體嗜堿性顆粒細胞分泌的糖蛋白質激素，通過血液循環到達性腺等靶器官發揮作用。促黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、促甲狀腺素(TSH)和促性腺素(CG)4種糖蛋白激素均由α和β2個亞基共軛結合而組成，在同一種內甚至是所有哺乳動物中，α亞基為它們共有，而β亞基具有物種和激素的特異性(PIERCE?J?G,PARSONS?T?F.Glycoprotein?hormones:structure?and?function[J].Annu.Rev.Biochem.1981,50:465-495.)，因此，對糖蛋白激素的研究重點在于β亞基。LHβ可以在排卵前選擇性誘導卵泡生長發育同時誘發排卵；促進黃體形成、分泌孕酮；刺激卵泡膜細胞分泌雄激素，擴散到卵泡液中被顆粒細胞攝取而芳構化為雌激素(楊利國.動物繁殖學[M].中國農業出版社.2005:3-7.)。LHβ發揮作用必須依賴其受體，LHβ或LHR基因發生突變，可能會導致LHβ表達量降低、與受體結合的活性部位發生失活或部分失活，或導致LHR降低或喪失受體功能，這些均會導致G蛋白偶聯及信號傳遞發生障礙，進而對家畜的繁殖性能產生影響(張雪琴等.LH/CG受體研究進展[J].草業與畜牧.2008,4:1-9.)。師慶偉等(師慶偉等.促黃體素(LH)β亞基基因的單核苷酸多態性及其與豬繁殖性狀的相關性[J].江蘇農業科學.2006,6:302-304.)在檢測民豬LHβ基因多態性時，發現第二外顯子SNP位點(T1757C)與母豬的產仔數(P<0.01)、初生窩重(P<0.01)及初生活仔窩重顯著相關(P<0.05)。劉源(劉源.綿羊高繁殖力候選基因LHβ和GnRHR的研究[D].南京:南京農業大學.2009.)在綿羊LHβ基因上檢測到6個多態位點(T286C、A424G、T439C、G705A、C1042G、C1136T)，其中T286C、C1042G、C1136T與綿羊產羔數顯著相關(P<0.05)，并且T286C還與綿羊的初生重相關(P<0.05)。黃勤華等(黃勤華等.貴州黑山羊促黃體素β基因多態性及其與產羔數的關系[J].貴州農業科學.2010,38(6):162-164.)報道在山羊群體中也存在與產羔數相關的多態位點。Yang等(Yang?W?C,Tang?K?Q,Li?S?J,et?al.Polymorphisms?of?the?bovine?luteinizing?hormone/choriogonadotropin?receptor(LHCGR)gene?and?its?association?with?superovulation?traits[J].Molecular?Biology?Reports.2012,39(3):2481-2487.)在奶牛LHR基因上檢測到4個SNPs(G51656T、A51703G、A51726G、G51737A)，其中G51656T與經過超數排卵處理后的排卵數顯著相關((P<0.05)，A51703G與超數排卵處理后的排卵數顯著相關(P<0.01)，可移植胚胎數顯著相關(P<0.01)。