[發明專利]一株產菊糖果糖轉移酶的菌株和用該酶生產雙果糖酐III的方法

有效

• 申請號: 201410327029.0
• 申請日: 2014-07-10
• 公開（公告）號: CN104087537A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 沐萬孟;江波;汪瀟;張濤
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/10;C12P19/18;C12P19/12;C12R1/06
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一株產菊糖果糖轉移酶的菌株，其分類命名為氯酚節桿菌（Arthrobacter?chlorophenolicus）SK?33.?001，已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M?2013387。

2.用權利要求1所述的微生物氯酚節桿菌?SK?33.?001，發酵生產菊糖果糖轉移酶的方法，其步驟為：

（1）種子培養

種子培養基：蛋白胨?1-10g/L、氯化鈉?1-10g/L、牛肉膏?1-5g/L、pH?7.0、去離子水配制；

種子培養條件：將氯酚節桿菌?SK?33.001接入種子培養基中，于25-30℃、160-240?rpm的振蕩條件下培養12-24h；

（2）發酵培養

發酵培養基：菊糖5-50g/L、硝酸鈉1-20g/L、酵母膏?1-5g/L、磷酸氫二鉀0.5-2g/L、硫酸鎂?0.5-3g/L、七水硫酸亞鐵?0.01-0.05g/L、pH?6.5-8.0、去離子水配制；

發酵條件：種子液接種量為1%-5%，在25-30℃、攪拌速度為200-500rpm、空氣流量為5-30m³/(L·h)的條件下在發酵培養基中發酵12-84h生產菊糖果糖轉移酶；

（3）發酵后處理

通過離心法除去發酵液中的菌體，得到菊糖果糖轉移酶粗酶液；將菊糖果糖轉移酶粗酶液進一步超濾濃縮，用3倍濃縮液體積的工業酒精沉淀蛋白質，離心和冷凍干燥得到菊糖果糖轉移酶粗酶粉。

3.用權利要求2所述方法制備的菊糖果糖轉移酶轉化菊糖生產雙果糖酐III的方法，其特征是：

向質量濃度1%-30%菊糖溶液中添加菊糖果糖轉移酶催化轉化，轉化反應條件為：底物菊糖濃度范圍為1%-30%，酶對底物的用量為0.01-10U/g，pH?4.0-8.0，轉化反應溫度為30-50℃，轉化反應時間3-24h，得到含有雙果糖酐III的酶反應液，用于制備雙果糖酐III糖漿、雙果糖酐III粉末或雙果糖酐III晶體。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征是制備雙果糖酐III糖漿，步驟為：

（1）脫色

在含有雙果糖酐III的酶反應液中添加酶反應液固形物含量0.2%-2%的活性炭，在80℃下溫育30min，然后進行硅藻土過濾，取脫色液；

（2）濃縮

將脫色液真空蒸發濃縮至固形物含量為60%-95%，即得雙果糖酐III糖漿。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征是制備雙果糖酐III粉末，步驟為：

（1）?脫色

同權利要求4所述脫色步驟；

（2）?濃縮

將脫色液真空蒸發濃縮至固形物含量為20%-40%的濃縮液；

（3）?噴霧干燥

將麥芽糊精與以固形物含量干基計的雙果糖酐III濃縮液按照重量比1︰1-5?的比例混合，控制進風溫度170-180℃、出風溫度為70-80℃，噴霧干燥，得到含麥芽糊精的雙果糖酐III粉末。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征是制備雙果糖酐III晶體，步驟為：

（1）脫色

同權利要求4所述脫色步驟；?

（2）結晶

將脫色液濃縮至固形物含量為60%-95%，快速降溫至50℃，緩慢均勻添加雙果糖酐III晶種，向濃縮液中緩慢加入0.2-2倍濃縮液體積的乙醇，通過12?h的緩慢降溫過程溫度降至10℃，得含雙果糖酐III晶體的糖膏，用乙醇清洗去除晶體表面的雜質，離心分離，真空干燥至恒重，得雙果糖酐III晶體。