[發明專利]超聲-微波協同提取的山茱萸環烯醚萜苷及其提取和測定方法

有效

• 申請號: 201410325551.5
• 申請日: 2014-07-09
• 公開（公告）號: CN104147079B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 康杰芳;楊寧;王紅菊;王韶君;白嫄;王喆之
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C07C29/00
• 分類號: C07C29/00;C07C27/26;A61K36/40;G01N30/02;G01N30/36;G01N30/88
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司61200
• 代理人: 陸萬壽

1.超聲-微波協同提取山茱萸環烯醚萜苷的方法，其特征在于，包括如下步驟，

(1)將新鮮成熟的山茱萸果實在開水中浸泡數分鐘后，流水沖洗冷卻，剝除果核；將剩余的果肉干燥后粉碎，過40目篩，得到山茱萸粗粉；

(2)稱取一定量的山茱萸粗粉，置于反應容器中，按料液比為1:21的比例加入體積分數為80％的甲醇溶液并密封，稱定重量，連接好冷凝裝置，在微波功率641W，超聲功率360W的條件下提取9min得到提取液；

(3)將提取液抽濾后得到濾液，將濾液用80％的甲醇溶液補充至稱定的重量，搖勻過0.22μm微孔濾膜，濃縮干燥，再經純化后得到山茱萸環烯醚萜苷；

所述的料液比1:21，微波功率為641W，超聲功率為360W和時間9min的提取條件由響應面法優化得到，步驟如下；

1)制備山茱萸環烯醚萜苷樣品液；

精密稱取山茱萸粗粉1.00g，置于反應瓶中，加入80％甲醇溶液密封，稱定重量，連接好回流裝置，在超聲-微波協同作用下中提取，抽濾，所得濾液再用80％甲醇溶液補至原重量，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，得到山茱萸環烯醚萜苷樣品液備用；分別精密稱取莫諾苷、馬錢苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷對照品1.00、0.50、0.10、0.20mg，置1mL容量瓶中，用色譜甲醇溶解并定容，0.22μm微孔濾膜過濾即得1.00mg/mL莫諾苷、0.50mg/mL馬錢苷、0.10mg/mL獐芽菜苷和0.20mg/mL山茱萸新苷混合對照品溶液；繪制標準曲線得線性回歸方程，并根據線性回歸方程計算出山茱萸樣品液中環烯醚萜苷的含量；

2)單因素實驗；根據步驟1)中山茱萸環烯醚萜苷樣品液的制備方法，分別按料液比、超聲功率、微波功率和提取時間四個單因素設計若干組單因素實驗；

3)響應面法優化；以山茱萸環烯醚萜苷提取率為響應因子，采用Design-Expert軟件中的Box-Behnken原理在步驟2)中單因素實驗的基礎上進行響應面實驗，模擬得到二次多元回歸方程如下：

R1＝26.25+0.49A-0.098B+1.42C-0.080D+0.21AB+0.65AC+0.88AD-0.29BC+0.54BD-0.22CD-0.91A²-1.02B²-2.89C²

其中，R1為相應因子，A為微波功率的影響量，B為超聲功率的影響量，C為料液比的影響量，D為時間的影響量；

4)通過Design-Expert軟件對回歸方程的求解，得到山茱萸環烯醚萜苷提取的最佳條件為：料液比1:21.45、微波功率640.57W、超聲功率356.59W、時間9.22min；再以實際操作為約束條件，將修正得到最佳提取工藝參數為：料液比1:21、微波功率641W、超聲功率360W、時間9min。

2.超聲-微波協同提取的山茱萸環烯醚萜苷，其特征在于，所述的山茱萸環烯醚萜苷由權利要求1中所述的提取方法制得。

3.根據權利要求2所述的超聲-微波協同提取的山茱萸環烯醚萜苷，其特征在于，至少包括莫諾苷、馬錢苷、獐牙菜苷和山茱萸新苷四種物質。

4.超聲-微波協同提取的山茱萸環烯醚萜苷的測定方法，其特征在于，對權利要求3所述的山茱萸環烯醚萜苷進行測定，包括如下步驟，

a.混合對照品溶液的制備；分別精密稱取莫諾苷、馬錢苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷對照品1.00、0.50、0.10、0.20mg，置1mL容量瓶中，加色譜甲醇溶解并定容，0.22μm微孔濾膜過濾即得1.00mg/mL莫諾苷、0.50mg/mL馬錢苷、0.10mg/mL獐芽菜苷和0.20mg/mL山茱萸新苷混合對照品溶液；

b.供試品溶液的制備，精密稱取過40目篩的山茱萸粗粉1.00g，置于XO-200型專用玻璃反應瓶中，加入80％甲醇溶液21mL密封，稱定重量，連接好回流裝置，于XO-200超聲微波組合反應系統中提取9min，取出，抽濾，所得濾液再用80％甲醇溶液補至原重量，搖勻，過0.22μm微孔濾膜作供試液；

c.測定法；采用HPLC-UV法測定混合對照品及供試品中莫諾苷、馬錢苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量；具體如下，

色譜條件：色譜柱：采用JADE-PAK ODS-AQ色譜柱為C18柱；柱溫：35℃；

檢測波長：240nm；

梯度洗脫條件：乙腈-0.2％乙酸水溶液梯度洗脫，A為0.2％乙酸水，B為乙腈；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；

以體積百分比計算，梯度洗脫階段如下，

0～15min，A從90％線性下降至80％，B從10％線性增加至20％；

15～19min，A從80％線性下降至78％，B從20％線性增加至22％；

19～25min，A從78％線性下降至75％，B從22％線性增加至25％；

25～35min，A從75％線性下降至73％，B從25％線性增加至27％；

35～50min，A從73％線性下降至0％，B從27％線性增加至100％，

50～55min，為100％B等度洗脫；

d.根據液相色譜分析結果計算分別得到山茱萸藥材中莫諾苷、馬錢苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量。