[發(fā)明專利]無(wú)抗原膠原聚集體及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410324893.5
• 申請(qǐng)日: 2014-07-09
• 公開（公告）號(hào): CN104107456A
• 公開（公告）日: 2014-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 但衛(wèi)華;劉新華;但年華;薛媛;劉科
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): A61L27/24
• 分類號(hào): A61L27/24;A61L27/58;A61L27/50
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.無(wú)抗原膠原聚集體，主要含有膠原纖維和膠原纖維束，其關(guān)鍵性能指標(biāo)如下：

外觀：白色絮狀，無(wú)肉眼可見之雜質(zhì)；

水分含量：≤20%（wt）；

重金屬含量：≤10μg/g(m/m)；

羥脯氨酸含量：不小于總蛋白含量的10%（m∕m）；

纖維長(zhǎng)度（mm）:10-20;

斷裂強(qiáng)度（cN/tex）:≥4.0;

斷裂伸長(zhǎng)率（%）:20~40;

細(xì)胞毒性：細(xì)胞毒性反應(yīng)不大于1級(jí)；

無(wú)菌試驗(yàn)：無(wú)菌；

致敏試驗(yàn)：無(wú)遲發(fā)性超敏反應(yīng)；

皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)：原發(fā)性刺激指數(shù)PII<0.4。

2.權(quán)利要求1所述無(wú)抗原膠原聚集體，特征在于，其制備方法包括如下步驟：

A）動(dòng)物皮或跟腱預(yù)處理：取新鮮可溯源的動(dòng)物皮或跟腱，清除動(dòng)物皮或跟腱表面的肌肉、邊緣軟骨、血管和筋膜組織，接著將其切成1.0～5.0mm×1.0～5.0mm的薄片，室溫下用生理鹽水浸泡30～90min，再用雙蒸水反復(fù)漂洗；

B）動(dòng)物皮或跟腱脫脂處理：將10重量份的動(dòng)物皮或跟腱的薄片放于超臨界流體處理器內(nèi)，加入200～400體積份的丙酮中，在壓力10.0-35.0Mpa、室溫的條件下處理1～5h，結(jié)束后用雙蒸水反復(fù)漂洗直至動(dòng)物皮或跟腱無(wú)丙酮?dú)馕叮?/p>

C）動(dòng)物皮或跟腱除去非膠原成分、脫細(xì)胞處理：在超聲波的條件下，將脫脂后的動(dòng)物皮或跟腱浸泡在Tris-NaCl（Tris:0.05?mol/L;?NaCl:?1?mol/L;?pH?7.5）緩沖溶液中，室溫?cái)嚢?0-24h，接著將其放于-80℃的速凍冰箱中反復(fù)凍融3～6次，雙蒸水反復(fù)清洗；繼續(xù)在超聲波的條件下，將凍融后的動(dòng)物皮或跟腱浸泡在1～1.5M?NaCl，10～15mM?EDTA的高滲溶液中，37℃下攪拌12～24h，接著將動(dòng)物皮或跟腱繼續(xù)浸泡在0.5～1%的十二烷基硫酸鈉溶液中，室溫下攪拌2～5h，用蒸餾水反復(fù)清洗，最后將動(dòng)物皮或跟腱浸泡在0.1～0.5%的胰酶和0.1～0.5%的EDTA混合溶液中，37℃下攪拌消化1～3h，用雙蒸水反復(fù)清洗，冷凍干燥獲得純化動(dòng)物皮或跟腱；

D）無(wú)抗原膠原聚集體的制備：取上述純化動(dòng)物皮或跟腱，將其浸漬2～10M醋酸溶液中2～14h，4～10℃恒溫條件下用勻漿機(jī)勻漿20～30min，將漿液在15000～20000rpm下離心20～30min，除去上清液，收集漿液，調(diào)節(jié)漿液pH至7.0～7.5，加入最終濃度為1.5mol/L的氯化鈉粉末，靜置12～20h，接著再次在15000～20000rpm離心20～30min，除去上清液，最后以超純水洗滌沉淀3～5次，最后經(jīng)冷凍干燥、劑量為?6～30KGy/h⁶⁰Co所產(chǎn)生的γ射線消毒滅菌，成型包裝，得到無(wú)抗原膠原聚集體。

3.權(quán)利要求2所述一種無(wú)抗原膠原聚集體及其制備方法，其特征在于所述的動(dòng)物皮或跟腱為新鮮、可溯源的，可以為豬、牛、驢等哺乳動(dòng)物的動(dòng)物皮或跟腱。

4.權(quán)利要求2所述一種無(wú)抗原腱源性膠原聚集體及其制備方法，其特征在于所述的胰酶的活力單位為1：10～1：25。

5.權(quán)利要求2中所述實(shí)施的超聲波頻率均為20～40?kHz，功率為50～120w。