[發(fā)明專利]人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410323921.1
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104072618B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐平;高媛;李衍常;趙明治;王京偉;常蕾;武軍駐;賀福初
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/10;C07K1/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，為如下(a)或(b)：

(a)由至少兩個互不相同的泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；

(b)由至少兩個相同的或彼此不同的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元串聯(lián)而成；所述雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元由至少兩個互不相同的泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；

所述泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域選自如下：UBA結(jié)構(gòu)域和ZnF-A20結(jié)構(gòu)域。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，其特征在于：所述人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1為如下(a)或(b)或(c)或(d)：

(a)由如下兩個泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列串聯(lián)組成：來自于酵母的DSK2p蛋白的UBA結(jié)構(gòu)域，以及來自于人類的RABGEF1蛋白的ZnF-A20結(jié)構(gòu)域；

(b)由n個相同的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元串聯(lián)而成；所述雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元由如下兩個泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成：來自于酵母的DSK2p蛋白的UBA結(jié)構(gòu)域，以及來自于人類的RABGEF1蛋白的ZnF-A20結(jié)構(gòu)域；

n為大于等于2的整數(shù)；

(c)由如下兩個泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列串聯(lián)組成：來自于酵母的DSK2p蛋白的UBA結(jié)構(gòu)域，以及來自于人類的UBQLN2蛋白UBA結(jié)構(gòu)域；

(d)由n個相同的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元串聯(lián)而成；所述雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域單元由如下兩個泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成：來自于酵母的DSK2p蛋白的UBA結(jié)構(gòu)域，以及來自于人類的UBQLN2蛋白UBA結(jié)構(gòu)域；

n為大于等于2的整數(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，其特征在于：所述來自于酵母的DSK2p蛋白的UBA結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如序列表中序列1的第237-281位所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，其特征在于：所述來自于人類的RABGEF1蛋白的ZnF-A20結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如序列表中序列1的第287-351位所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，其特征在于：所述來自于人類的UBQLN2蛋白UBA結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如序列表中序列2的第287-336位所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1，其特征在于：所述雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1的氨基酸序列為如下(a1)-(a5)中任一種：

(a1)序列表中序列1的第237-351位；

(a2)序列表中序列1的第237-471位；

(a3)序列表中序列1的第237-711位；

(a4)序列表中序列2的第237-336位；

(a5)序列表中序列2的第237-651位。

7.人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽2，為在權(quán)利要求1-6任一所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽1上連接標簽蛋白后得到的多肽；

所述標簽蛋白為能夠進行親和純化的標簽蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽2，其特征在于：所述標簽蛋白選自如下：谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶標簽、His標簽、Flag標簽、HA標簽、Myc標簽、麥芽糖結(jié)合蛋白標簽、T7標簽、纖維素結(jié)合域標簽、鈣調(diào)蛋白標簽。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽2，其特征在于：所述標簽蛋白為谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶標簽；

所述谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶標簽的核苷酸序列為序列表中序列1的第1-231位。

10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一所述的人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽2，其特征在于：所述人工構(gòu)建的雜種泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽2的氨基酸序列為如下(b1)-(b5)中任一種：

(b1)序列表中序列1的第1-351位；

(b2)序列表中序列1的第1-471位；

(b3)序列表中序列1的第1-711位；

(b4)序列表中序列2的第1-336位；

(b5)序列表中序列2的第1-651位。