[發(fā)明專利]用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410323478.8
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104277236B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高城誠太郎;水野恒;中川博之;萩山敏行;吉村篤軌;田中賢;佐佐木彩乃;高橋俊文;太田剛
• 申請（專利權(quán)）人: 豐田合成株式會社;國立大學法人山形大學
• 主分類號: C08J9/02
• 分類號: C08J9/02;C08J5/18;C08G18/48;C08G18/42;C08G18/44;C08G18/63;C08G18/32;C12N5/09;C08G101/00
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11112
• 代理人: 宋丹氫,張?zhí)焓?/td>

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求享有2013年7月9日提交的日本專利申請P2013-143371和2014年5月14日提交的日本專利申請P2014-104225的優(yōu)先權(quán)，這兩件申請的全部內(nèi)容在此以引用方式并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制的至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜的制備方法。

背景技術(shù)

作為可用于包括藥物發(fā)現(xiàn)和再生醫(yī)學在內(nèi)的多種領(lǐng)域的技術(shù)，細胞培養(yǎng)技術(shù)近來受到了關(guān)注。將作為細胞支架(cell scaffold)的基材(substrate)用于貼壁依賴性細胞的培養(yǎng)。關(guān)于細胞培養(yǎng)所使用的基材，如本領(lǐng)域已知的，基材表面上的微小物理結(jié)構(gòu)以及化學性質(zhì)很重要。已知基材之一是這樣一種基材，其由聚合物材料制成，并且在表面上具有微小的凹凸體。可以采用多種技術(shù)來提供帶有微小凹凸體的、由聚合物材料制成的基材，例如，縮合技術(shù)、納米壓印技術(shù)、光刻或乳膠技術(shù)(例如，JP2009-242495A)。

發(fā)明內(nèi)容

然而，細胞培養(yǎng)基材的現(xiàn)有生產(chǎn)方法都是相當復(fù)雜的，并且需要許多步驟，因此難以降低制造成本。另外，現(xiàn)有技術(shù)方法通常難以制備具有貫通至下表面的孔的多孔膜。在細胞培養(yǎng)使用具有通孔的多孔膜的情況下，多孔膜的上表面和下表面二者都能用于細胞培養(yǎng)。例如，在上前表面和下表面上可以培養(yǎng)不同類型的細胞。這會擴大細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用。為此目的，需要開發(fā)一種具有通孔的細胞培養(yǎng)片材。尤其是，尚未有已知的方法來制備具有孔徑小于10微米的通孔的細胞培養(yǎng)用多孔膜。由于標準細胞尺寸為大約10微米，希望使用具有孔徑小于10微米的通孔的多孔膜，以允許對不同類型細胞之間的相互作用進行分析。因此，需要開發(fā)具有孔徑小于10微米的通孔的多孔膜。

已知的是，一些在其上表面上形成有微小凹凸體的多孔膜對細胞生長抑制是有效果的(例如，JP2005-152526A)。希望對癌細胞生長抑制具有效果(作為對細胞生長抑制的效果的一個例子)的多孔膜能夠用于癌癥治療，用于抑制癌癥復(fù)發(fā)或癌癥轉(zhuǎn)移，或者用于癌癥研究。因此，需要通過簡單的制造工藝來生產(chǎn)具有這種對細胞生長抑制效果的多孔膜。

為了解決上述問題中的至少一部分，通過以下方面和實施方式完成了本發(fā)明。

(1)根據(jù)一個方面，提供了一種用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中的至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜的制備方法。這種聚氨酯多孔膜的制備方法包括：第一步驟，在基材上形成未固化的聚氨酯材料層；以及第二步驟，向形成于基材上的聚氨酯材料層中遠離基材的暴露表面供給水蒸汽，以使聚氨酯材料固化，并且向聚氨酯材料層提供具有位于暴露表面上的多個凹凸體的多孔結(jié)構(gòu)。

根據(jù)本方面的用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜的制備方法，該方法通過向聚氨酯材料層供給水蒸汽這樣的簡單工藝，制備了用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜。這有利地降低了聚氨酯多孔膜的制造成本。

(2)根據(jù)(1)所述的用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜制備方法的一個實施方案，在第二步驟中所提供的聚氨酯多孔膜的多孔結(jié)構(gòu)可以包括向暴露表面開放的多個孔，并且僅有單一的孔沿聚氨酯多孔膜的膜厚度方向存在。根據(jù)本實施方案的聚氨酯多孔膜的制備方法能夠制備適于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜。

(3)根據(jù)(2)所述的用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜制備方法的另一實施方案，聚氨酯多孔膜可以具有0.1～100微米的厚度。根據(jù)本實施方案的聚氨酯多孔膜制備方法，使得能夠制備適于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜。

(4)根據(jù)(3)所述的用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜制備方法的另一實施方案，通過對條件進行調(diào)節(jié)，可以將聚氨酯多孔膜的厚度控制到0.1～100微米，所述條件選自：第一步驟中形成為層的聚氨酯材料的組成，第二步驟中的反應(yīng)溫度，以及第二步驟中的反應(yīng)時間。根據(jù)本實施方案的聚氨酯多孔膜制備方法能夠容易地制備適于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜。

(5)根據(jù)(2)所述的用于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜的制備方法的另一實施方案，聚氨酯多孔膜在暴露表面上可以具有0.1～100微米的平均孔徑。根據(jù)本實施方案的聚氨酯多孔膜的制備方法能夠制備適于細胞培養(yǎng)和癌細胞生長抑制中至少一種應(yīng)用的聚氨酯多孔膜。