[發明專利]一種細菌染色方法

在審

• 申請號: 201410321905.9
• 申請日: 2014-07-07
• 公開（公告）號: CN104089807A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 佘銳萍;杜芳
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

技術領域

本發明涉及一種細菌染色方法，屬于微生物領域。

背景技術

細菌是一類原核細胞型微生物，因為菌體小、半透明，要想更清楚的觀察其大小和形態，需經染色和顯微鏡放大后才能看到。常用的細菌染色法有單染法、復染法和鑒別染色法，主要有革蘭氏染色、美藍染色、抗酸染色、瑞氏染色和姬姆薩染色等方法。在進行上述染色之前，需要制備細菌抹片，但是對石蠟切片的組織中的細菌染色報道還不多見。開發一種既適用于石蠟切片又適用于細菌抹片的細菌染色方法具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種細菌染色方法——甲苯胺藍法，利用該方法對石蠟切片進行快速染色，可以對其中的細菌進行很好的定位，而且，該方法對細菌抹片也同樣適用，而且步驟簡單，容易控制。

本發明提供一種細菌染色方法，是用甲苯胺藍溶液進行染色；

所述甲苯胺藍溶液按照如下方法制備：

A液：將0.8g甲苯胺藍在80毫升蒸餾水中溶解；

B液：將0.6g高錳酸鉀在20毫升蒸餾水中溶解；

將A液煮沸，再將B液滴入A液中，再煮沸，用蒸餾水補足至100毫升，自然冷卻后過濾即得；

所述煮沸的時間為10min。

上述方法中，所述染色的時間為5-15s，具體為10s。

上述任一所述的方法中，所述細菌是石蠟切片或細菌抹片中的細菌。

上述任一所述的方法中，所述染色之后還包括如下步驟：將甲苯胺藍溶液染色后的石蠟切片或細菌抹片放入體積百分含量95％的乙醇水溶液中洗去浮色；

所述洗去浮色的標準是石蠟切片的組織顏色變為淺藍色或細菌抹片中的細菌顯示出明顯的藍色形態。

上述任一所述的方法中，所述石蠟切片在甲苯胺藍溶液中染色之前，還包括脫蠟至水的步驟；

所述脫蠟至水具體是將石蠟切片依次經過二甲苯、等體積二甲苯和無水乙醇的混合液、無水乙醇、體積百分含量為95％的乙醇水溶液、體積百分含量為90％的乙醇水溶液、體積百分含量為80％的乙醇水溶液、體積百分含量為70％的乙醇水溶液、蒸餾水，石蠟切片在各試劑中的時間為3-5min；

所述細菌抹片在甲苯胺藍溶液中染色之前，還包括火焰固定的步驟；

所述火焰固定是將自然干燥的細菌抹片涂抹面向上，以其背面在火焰外焰上加熱，以不燙手為度進行固定。

上述任一所述的方法中，所述石蠟切片在洗去浮色之后，還包括將其依次經過無水乙醇，等體積的二甲苯和無水乙醇的混合液、二甲苯，最后將切片用中性樹膠封片的步驟；

所述石蠟切片在所述無水乙醇，等體積的二甲苯和無水乙醇的混合液、二甲苯中的時間為5-10min，具體為5min；

所述細菌抹片在洗去浮色之后，還包括自然晾干的步驟。

上述任一所述的方法中，所述石蠟切片為鴿子嗉囊組織的石蠟切片或孟加拉虎動物腸道組織的石蠟切片；

所述細菌抹片為蠟樣芽孢桿菌的抹片。

本發明提供的方法具有如下優點：

1、本發明的方法不僅可以對細菌抹片進行染色，而且也可以顯示石蠟切片組織中的細菌。

2、本發明的方法與現有的細菌染色方法(比如革蘭氏染色法和瑞氏染色法)相比較，具有方便、快捷的優點。

附圖說明

圖1為甲苯胺藍染色顯示嗉囊組織石蠟切片中的細菌圖1。

圖2為甲苯胺藍染色顯示嗉囊組織石蠟切片中的細菌圖2。

圖3為甲苯胺藍染色顯示腸道組織石蠟切片中的細菌圖1。

圖4為甲苯胺藍染色顯示腸道組織石蠟切片中的細菌圖2。

圖5為甲苯胺藍染色顯示蠟樣芽孢桿菌純培養物圖1。

圖6為甲苯胺藍染色顯示蠟樣芽孢桿菌純培養物圖2。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

甲苯胺藍溶液的配制方法：

A液：甲苯胺藍0.8g溶于80毫升蒸餾水中；

B液：高錳酸鉀0.6g溶于20毫升蒸餾水中；

將已溶解的A液煮沸10分鐘，再將已溶解的B液逐滴加入A液中，再煮沸10分鐘，用蒸餾水補足至100毫升，待自然冷卻后過濾備用。