[發(fā)明專利]一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410321722.7
• 申請(qǐng)日: 2014-07-07
• 公開（公告）號(hào): CN104155372A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉文婷;雷新慧;徐婷;張建;母凌燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市格瑞斯特環(huán)保技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 劉先珍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種毒素含量的檢測(cè)方法，具體涉及一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

微囊藻毒素(microcystins,?MCs)是一類由藍(lán)藻產(chǎn)生的單環(huán)七肽結(jié)構(gòu)的天然肝毒素，是水體中最常見的一種藍(lán)綠藻毒素。目前已知存在的最普遍、含量相對(duì)較多，毒性較大的MC主要是MC-LR。其他的如MC-YR、MC-RR、MC-LF、MC-LW也較為常見。?MC在陽光照射下非常穩(wěn)定，但暴露在紫外線下可水解或發(fā)生化學(xué)異構(gòu)、化學(xué)鍵合反應(yīng)而喪失毒性，尤其當(dāng)紫外線波長(zhǎng)接近其吸收峰最大吸收波長(zhǎng)時(shí)，MC被迅速地降解。藻毒素很高的耐熱性，加熱煮沸都不能將毒素破壞，也不能將其去除。

MC廣泛存在于作為飲水來源的富營(yíng)養(yǎng)湖泊、池塘和河流等水體中。MC不僅能直接導(dǎo)致一些水生生物如魚類、貝類及蚌類的患病及死亡，而且一些野生動(dòng)植物及家畜、家禽飲用了含有產(chǎn)毒藻種及藻毒素的水后，也會(huì)引起中毒甚至死亡，MC可通過食物鏈的生物富集危害人類的健康。MC可通過多種途徑進(jìn)入人體，如通過口、鼻、皮膚等途徑攝入；通過飲水?dāng)z入；通過食用水產(chǎn)品或藻類食品攝入等，如魚類處于水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈的較高等級(jí)，通過生物富集作用會(huì)在體內(nèi)積累比環(huán)境水中含量更高的MC，從而給人群健康帶來直接的安全隱患。因此，測(cè)定水產(chǎn)品中微囊藻的毒素含量是非常必要的。

目前，微囊藻毒素檢測(cè)方法主要有生物測(cè)試法，氣相色譜法，酶聯(lián)分析法，蛋白磷酸酶抑制分析法和細(xì)胞毒素研究技術(shù)等。生物測(cè)試法操作簡(jiǎn)單快速，結(jié)果直觀，但是卻會(huì)消耗較多的毒素，靈敏度和專一性不高，最小研究線要用半致死量和致死量來衡量；聯(lián)酶分析法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，能檢出毒素的不同同系物，但是對(duì)多種同系物的識(shí)別需要廣譜抗體；蛋白磷酸酶抑制分析法的缺陷是不能區(qū)分特異性的同系物，而細(xì)胞毒素研究技術(shù)則是生產(chǎn)工作量大，最小檢出限為10~20mg/ml，準(zhǔn)確度不高。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法無需有機(jī)溶劑、測(cè)試快速安全、選擇性好且靈敏度高，使得樣品處理技術(shù)及分析操作簡(jiǎn)單省時(shí)。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）分別配置若干梯度濃度的微囊藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)其分別進(jìn)行色譜分析，獲得峰面積，并分別以所述梯度濃度和峰面積為橫縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線；

2）吸取設(shè)定體積的樣品溶液進(jìn)行色譜分析，測(cè)定其峰面積，并通過步驟1）所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品溶液的微囊藻毒素濃度。

優(yōu)選地，所述色譜分析條件如下：

色譜柱：C18，250mm×4.6mm，粒徑5μm；

柱溫：35℃；

流動(dòng)相：乙腈+水+三氟乙酸=（36+64+0.10）；

流速：1.0ml/min；

波長(zhǎng)：240nm；

進(jìn)樣量：20μL。

優(yōu)選地，所述樣品經(jīng)過前處理獲得，其步驟為：取出待檢測(cè)水產(chǎn)品中富含微囊藻毒素的部分，然后醇取樣品并對(duì)醇取后的樣品進(jìn)行干燥和研磨。

優(yōu)選地，所述樣品溶液最后按以下公式計(jì)算樣品中微囊藻毒素的濃度：????????????????????????????????????????????????

式中：

C_樣——樣品中微囊藻毒素的濃度，單位為μg/g；

C_測(cè)——測(cè)試溶液中微囊藻毒素的濃度，單位為μg/ml；

V?——樣品溶液的體積，單位為ml；

m₀——水產(chǎn)品的取樣量，單位為g。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的檢測(cè)方法準(zhǔn)確方便、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，檢出限為0.01μg/kg，且無需有機(jī)溶劑、測(cè)試快速安全、選擇性好且靈敏度高，能集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體，還能夠與液相色譜儀聯(lián)用，可手動(dòng)和自動(dòng)操作，使得樣品處理技術(shù)及分析操作簡(jiǎn)單省時(shí)。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步說明：

圖1是本發(fā)明的檢測(cè)方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請(qǐng)中的實(shí)施例及實(shí)施例中的特征可以相互組合。

如圖1所示，本實(shí)施例的實(shí)施步驟主要分為配置微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品前處理和對(duì)測(cè)試溶液進(jìn)行色譜分析并計(jì)算樣品中微囊藻毒素的濃度四個(gè)步驟，各個(gè)步驟的具體操作為：