[發明專利]在微生物中生產油

有效

• 申請號: 201410321130.5
• 申請日: 2008-06-02
• 公開（公告）號: CN104212844A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: D·E·特里穆博;C-S·伊姆;H·F·狄龍;A·G·戴;S·富蘭克林;A·科拉格利奧蒂
• 申請（專利權）人: 索拉茲米公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12P5/02;C12N1/13;C12N1/19;C12N15/52
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

1.生產可再生柴油的方法，包括：

(a)在存在固定的碳源時培養微生物群體，其中：

(i)微生物將其干細胞重量的至少10％作為脂質累積；和

(ii)固定的碳源選自甘油、解聚合的纖維素材料、蔗糖、糖蜜、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、甘露糖、乙酸鹽及前述的任一組合；

(b)從培養的微生物中分離脂質組分；和

(c)對分離的脂質組分進行一個或多個化學反應以產生直鏈烷烴，從而產生可再生的柴油。

2.生產噴氣式發動機燃料的方法，包括：

(a)在存在固定的碳源時培養微生物群體，其中：

(i)微生物將其干細胞重量的至少10％作為脂質累積；和

(ii)固定的碳源選自甘油、解聚合的纖維素材料、蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、甘露糖、乙酸鹽及前述的任一組合；

(b)從培養的微生物中分離脂質組分；和

(c)對分離的脂質組分進行一個或多個化學反應以產生直鏈烷烴，從而產生噴氣式發動機燃料。

3.根據權利要求1的方法制造的液態烴組合物，其中該組合物符合ASTM?D975規范。

4.根據權利要求2的方法制造的液態烴組合物，其中所述組合物符合ASTM?D1655規范。

5.微藻或酵母細胞，所述微藻或酵母細胞已被遺傳改造和/或選擇，從而與相同物種的野生型細胞相比以改變的水平表達脂質途徑酶。

6.含有一種或多種外源基因的產油微生物，其中所述外源基因編碼選自以下的蛋白質：脂肪酰基-ACP硫酯酶、脂肪酰基-CoA還原酶、脂肪醛還原酶、脂肪酰基-CoA/醛還原酶、脂肪醛脫羰基酶和酰基載體蛋白。

7.含有兩種外源基因的微生物，其中第一外源基因編碼脂肪酰基-ACP硫酯酶，第二外源基因編碼選自脂肪酰基-CoA還原酶、脂肪酰基-CoA/醛還原酶和酰基載體蛋白的蛋白質。

8.在微生物群體中生產分子的方法，所述方法包括在培養基中培養微生物群體，其中所述微生物含有：

(i)編碼脂肪酰基-ACP硫酯酶的第一外源基因，和

(ii)編碼脂肪酰基-CoA/醛還原酶的第二外源基因；并且

其中所述微生物合成與酰基載體蛋白(ACP)連接的脂肪酸，所述脂肪酰基-ACP硫酯酶催化從ACP上切割脂肪酸，通過進一步加工產生脂肪酰基-CoA，并且脂肪酰基-CoA/醛還原酶催化所述酰基-CoA還原成為醇。

9.在微生物群體中生產脂質分子的方法，所述方法包括在培養基中培養微生物群體，其中微生物含有：

(i)編碼脂肪酰基-ACP硫酯酶的第一外源基因，和

(ii)編碼脂肪酰基-CoA還原酶的第二外源基因；并且

其中微生物合成與酰基載體蛋白(ACP)連接的脂肪酸，脂肪酰基-ACP硫酯酶催化從ACP上切割脂肪酸，通過進一步加工得到脂肪酰基-CoA，并且脂肪酰基-CoA還原酶催化酰基-CoA還原成為醛。

10.在微生物群體中生產具有特定碳鏈長度的脂肪酸分子的方法，所述方法包括在培養基中培養生產脂質的微生物群體，其中所述微生物含有編碼脂肪酰基-ACP硫酯酶的外源基因，所述酶具有對碳鏈長度特異的活性，并且其中所述微生物合成與酰基載體蛋白(ACP)連接的脂肪酸，并且當脂肪酸被合成至特定的碳鏈長度時，硫酯酶催化從ACP上切割脂肪酸。

11.含有外源基因的微藻細胞，其中所述外源基因編碼選自脂肪酶、蔗糖轉運蛋白、蔗糖轉化酶、果糖激酶或多糖降解酶的蛋白質。

12.含有兩種外源基因的微藻細胞，其中第一外源基因編碼脂肪酶，第二外源基因編碼多糖降解酶。

13.在微生物中制造脂質分子的方法，所述方法包括：

(a)將微生物培養足以提高細胞密度的第一段時間，其中所述微生物含有：

(i)編碼脂肪酶的外源基因；和/或

(ii)編碼多糖降解酶的外源基因；

其中所述外源基因與應答刺激的誘導型啟動子有效連接；

(b)提供所述刺激；和

(c)在存在所述刺激時將微生物孵育第二段時間。