[發明專利]一種與玉米青枯病抗性基因緊密連鎖的分子標記、引物及其應用

有效

• 申請號: 201410321024.7
• 申請日: 2014-07-07
• 公開（公告）號: CN104087579A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 朱先飛;耿延琢;王利明;王兆賢;張二朋;楊焰華;齊偉;王麗梅
• 申請（專利權）人: 合肥豐樂種業股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;A01H1/04
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

1.一種與玉米青枯病抗性基因緊密連鎖的分子標記，其特征在于，所述分子標記為序列表SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列或序列表SEQ?ID?NO：2所示核苷酸序列。?

2.一種擴增權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于，所述引物對的引物1為序列表SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列，所述引物對的引物2為SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列。?

3.一種檢測玉米青枯病抗性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：?

(1)PCR擴增：以待測玉米提取的基因組作為DNA擴增模板，以序列表SEQ?ID?NO：3所示核苷酸序列和序列表SEQ?ID?NO：4所示核苷酸序列組成為擴增引物對進行PCR擴增；?

(2)擴增產物的鑒定：若所得PCR擴增產物為234bp堿基片段，則待玉米為抗青枯病品種，若所得PCR擴增產物為274bp堿基片段，則待測玉米為青枯病感病品種。?

4.根據權利要求3所述的一種檢測玉米青枯病抗性的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，234bp堿基片段為序列表SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列；274bp堿基片段為序列表SEQ?ID?NO：2所示核苷酸序列。?

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的待測玉米提取的基因組方法為堿煮法，具體步驟為：取1/20的玉米籽粒胚乳用0.2Mol/L氫氧化鈉40ml在100℃水浴5分鐘，再加入60ml的0.17Mol/Ltris-HCL水浴3分鐘，4℃冰箱冷卻備用，即得所述待測玉米提取的基因組。?

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的PCR擴增的反應體系為：含Mg2+的10X?Buffer2μ1，1OmM的dNTP0.4μl，5μM的序列表SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列和序列表SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列各2μ1，所述待測玉米提取的基因組DNA1μ1,5U/μ1的taq酶0.5μ1，其余為超純水，反應體積為20μ1，滴加一滴礦物油覆蓋；PCR反應程序為：94℃5min；94℃60s、53.5℃60s,72℃60s,35個循環；72℃1Omin。?

7.根據權利要求1所述的分子標記在玉米育種中的應用。?

8.根據權利要求2所述的引物對在玉米育種中的應用。?

9.根據權利要求3－6中任一項用于檢測玉米青枯病抗性的方法在玉米育種?中的應用。?