[發明專利]一種抑制Smad4基因表達的siRNA分子及其應用

有效

• 申請號: 201410320910.8
• 申請日: 2014-07-07
• 公開（公告）號: CN104232640B
• 公開（公告）日: 2016-10-19
• 發明（設計）人: 薛鳴豐;龔遂良;戴加平
• 申請（專利權）人: 薛鳴豐
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 郭小麗

技術領域

本發明涉及siRNA分子技術領域，具體涉及一種抑制Smad4基因表達的siRNA分子及其應用。?

背景技術

凍結肩是一種以進行性發展的肩關節疼痛和關節活動受限為特點的肩關節疾病，俗稱為“肩周炎”，分為原發性和繼發性。凍結肩的病理變化目前主要認為是關節囊纖維化。凍結肩最具特征性的臨床表現為肩關節各個方向的主動與被動活動受限，尤以外旋活動受限為甚。在漫長的疼痛期和僵硬期，患者往往因疼痛劇烈難忍及關節活動度明顯受限嚴重影響日常生活而四處求醫，往往耗費巨大的經費仍無法根治疾病。?

轉化生長因子-β(transforming?growth?factor-β,TGF-β)是一種多功能細胞因子，對細胞外基質基因表達、基質降解、細胞增殖分化、細胞凋亡及免疫功能均具有明確作用。TGF-β也是一種促纖維化因子，在纖維化形成的過程中，TGF-β可促進細胞外基質的形成，促進成纖維細胞合成膠原蛋白、纖維粘連蛋白及蛋白多糖等細胞外基質，同時促進細胞外基質蛋白特異性表面膜受體的表達，還可促進上皮細胞轉變為成纖維細胞。研究證實，TGF-β在肝纖維化、肺間質纖維化等疾病的發病機制中均占重要地位。另外，研究也發現，原發性凍結肩和繼發性凍結肩患者肩關節囊中TGF-β及其受體表達均明顯升高，說明關節囊纖維化在凍結肩的發生發展過程中有重要作用。Smads蛋白家族成員作為TGF-β下游的受體激酶，在TGF-β信號通路中扮演著重要的介導作用。迄今為止，在哺乳動物中發現了8種不同的Smads家族成員。根據他們的結構和功能不同，Smads被分為3個亞族：(1)受體激活的Smads(R-Smads)，包括Smad1、2、3、5、8，它們可與TGF-β受體直接作用并磷酸化，之后再與Smad4結合為二聚體轉位入核；(2)通用型Smad(Co-Smad)，目前在人類僅發現Smad4，是所有?R-Smads的結合配體，并促進R-Smads轉移入細胞核，可與Smads家族其他成員相互作用形成穩定的異源多聚體，入核后調節靶基因轉錄；(3)抑制型Smads(I-Smads)，包括Smad6、7，為TGF-β-Smad信號轉導通路的負調節因子，可與R-Smads競爭性結合受體，阻止R-Smads磷酸化，從而阻斷TGF-β的生物學效應，其中Smad7主要是抑制磷酸化Smad與Smad4的結合。Smad4是該條信號通路中極為重要的一個蛋白，它與不同的Smad蛋白的協同作用是TGF-β超家族信號轉導途徑中的關鍵環節，正如一個交通樞紐，涉及Smad4下游調控或者交互對話信號通路，在整個信號轉導過程中發揮非常重要的作用，如能針對性地阻斷該條通路的信號轉導，將能特異地抑制TGF-β的纖維化作用，對治療原發性凍結肩提供一條嶄新的道路。?

對凍結肩治療目前主要集中在對癥治療上，包括口服非甾體類抗炎藥、局部封閉治療、物理治療、局部熱敷、推拿按摩等，同時結合鍛煉肩關節活動度；保守治療遷延漫長，且往往效果不佳，患者長年累月往返奔波于各種醫院與康復中心，尋求各種治療手段。除保守治療外，目前還有麻醉下手法松解及關節鏡下粘連松解術。麻醉下手法松解是采用手法松解關節周圍的一些粘連組織，以恢復關節活動度，但易發生肩關節脫位、肱骨或關節盂的骨折、肩袖損傷以及臂叢神經損傷等并發癥。對于疼痛和活動受限明顯影響日常活動，患者無法忍受時，可考慮在關節鏡下行粘連松解。上述2種方法均存在一定并發癥，患者常常存在一定顧慮，而且手術費用增加了經濟負擔，患者不一定能夠接受。鑒于凍結肩的發病特點、對患者日常生活的嚴重影響以及反復求醫所造成巨大的經濟負擔，而目前又無切實、有效的治療凍結肩的手段，因此目前亟待解決的是探求一種簡單、有效、經濟、安全的治療手段，以最大程度減輕患者痛苦、降低醫療資源負擔。?