[發(fā)明專利]一種紅色諾卡氏菌新的培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410320363.3
• 申請(qǐng)日: 2014-07-08
• 公開（公告）號(hào): CN104099271A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝必峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 謝必峰
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/365
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架生產(chǎn)菌紅色諾卡氏菌新的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

1984年福建省微生物研究所在昆明的土壤中篩選到一株紅色諾卡氏菌PO-8(菌種保藏編號(hào)：CGMCC?NO：0187)，由該菌提取獲得的紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架制成的凍干粉針劑已獲準(zhǔn)上市，作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，廣泛用于控制各種腫瘤所引起的胸水和腹水，并且能很好的輔助如膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤的治療(《中國(guó)生物制品規(guī)程》2000年版)。

現(xiàn)有獲準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝“紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架制劑制造及檢定規(guī)程”以及相關(guān)專利(專利號(hào)CN93104969.5/名稱為“利用紅色諾卡氏菌制造細(xì)胞壁骨架粉末的方法”)表明一種利用相同保藏編號(hào)的紅色諾卡氏菌菌種，“振蕩通氣培養(yǎng)”以及“經(jīng)培養(yǎng)基進(jìn)行菌體培養(yǎng)與制備、菌體破壁、蛋白酶處理、溶媒提出、真空干燥處理制造骨架粉末的方法，”其中，培養(yǎng)特征為“旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)或采用振動(dòng)培養(yǎng)”方式，這些描述均指搖瓶培養(yǎng)方式。專利號(hào)201210466904.4、名稱紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架口含片及其制備方法，僅涉及制劑的制備方法；其他專利均僅涉及紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架的相關(guān)藥物用途方面，如：申請(qǐng)?zhí)朇N200510077407.5：紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架在制備抗真菌感染的藥物中的用途；以及CN200510127603.9、CN200610082627.1/CN200610156653.4/CN02132415.8/CN200510105533.7/201310101232.1。

目前尚未見有關(guān)紅色諾卡氏菌其他培養(yǎng)方法的文獻(xiàn)報(bào)道。獲準(zhǔn)生產(chǎn)的現(xiàn)有培養(yǎng)工藝是采用玻璃搖瓶恒溫振蕩培養(yǎng)(《中國(guó)生物制品規(guī)程》2000年版的“紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架制劑制造及檢定規(guī)程”)，該方式批培養(yǎng)裝液量有限、不易于用于自動(dòng)化工業(yè)化生產(chǎn)，使得生產(chǎn)規(guī)模受到制約；同時(shí)，規(guī)模化培養(yǎng)具有培養(yǎng)過程的溫度、酸堿度、溶解氧(通氣)等參數(shù)不易精確自動(dòng)控制，瓶間差異大，造成菌體產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定；而且，溶氧效果相對(duì)較差，菌體生長(zhǎng)速度慢，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，收率較低等缺點(diǎn)。

采用機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐培養(yǎng)微生物，是目前成熟的培養(yǎng)方式，它具有培養(yǎng)液均勻、溶氧好、裝液量大、易于調(diào)節(jié)控制及放大等優(yōu)點(diǎn)，使之規(guī)模化的生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品均勻穩(wěn)定。但是不同的微生物、不同的培養(yǎng)目的，發(fā)酵罐培養(yǎng)控制參數(shù)，如：培養(yǎng)基配方、裝料量、接種量、溫度、攪拌速度、通氣量等，均有不同的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有搖瓶培養(yǎng)技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種紅色諾卡氏菌新的培養(yǎng)方法，該方法為在5升以上機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐中擴(kuò)大培養(yǎng)，用于注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架的制備。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種紅色諾卡氏菌新的培養(yǎng)方法，為在5升以上機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐中擴(kuò)大培養(yǎng)，包括如下步驟：將紅色諾卡氏菌種子液接種到裝有培養(yǎng)基的容積5升以上機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐中培養(yǎng)。其中，所述的培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖1％、酵母粉1％、pH7.0-7.2；在發(fā)酵罐中培養(yǎng)的條件優(yōu)選為：攪拌轉(zhuǎn)速250-350r/min、通氣量1∶0.83-1.1(發(fā)酵液體積與每分鐘通氣量的體積比)、接種量7.0-11.0％、裝液量為罐容積的60％、溫度28-30℃；更優(yōu)選的，在發(fā)酵罐中培養(yǎng)條件為：攪拌轉(zhuǎn)速289-307r/min、通氣量1∶0.97-1.03、接種量8.6-9.2％。

所述的紅色諾卡氏菌優(yōu)選為紅色諾卡氏菌PO-8，保藏編號(hào)為CGMCC?NO：0187。

所述的種子液優(yōu)選通過包含如下步驟的方法培養(yǎng)得到：將紅色諾卡氏菌PO-8接種到培養(yǎng)基中，在28℃、220r/min的搖床下培養(yǎng)36-38h；該培養(yǎng)基的配方也為：葡萄糖1％、酵母粉1％，pH7.0-7.2。

本發(fā)明的有益效果在于：提供一種生產(chǎn)紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架的紅色諾卡氏菌培養(yǎng)方法，相對(duì)于現(xiàn)有搖瓶培養(yǎng)技術(shù)，機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐培養(yǎng)使得菌體生長(zhǎng)速度快、培養(yǎng)周期縮短；菌體產(chǎn)品更加均勻；菌體收率更高、培養(yǎng)規(guī)模更易于擴(kuò)大等，更有助于提高相關(guān)藥物的生產(chǎn)效率、實(shí)現(xiàn)擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。