[發(fā)明專利]一種直接測定冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410320033.4
• 申請日: 2014-07-07
• 公開（公告）號: CN104090038A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設計）人: 黃宏南;吳志仁;王娟娟
• 申請（專利權）人: 黃宏南
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務所(普通合伙) 35220
• 代理人: 陳智雄;黃秀婷

技術領域

本發(fā)明屬于食品檢驗與分析領域，具體為一種采用HPLC-PDA法準確、快速地測定冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽含量的方法。

背景技術

冬蟲夏草(學名：Ophiocordyceps?sinensis)，又名中華蟲草，是中國歷史中傳統(tǒng)的名貴中藥材，主要產(chǎn)于中國大陸青海、西藏、四川、云南、甘肅和貴州等省及自治區(qū)的高寒地帶和雪山草原。現(xiàn)代醫(yī)學證明冬蟲夏草具有鎮(zhèn)靜、止咳化痰和抑制腫瘤細胞生長、增加機體對健身防病有著特有免疫的功效，冬蟲夏草多糖肽就是其中的主要功效成分之一。冬蟲夏草多糖肽是一種糖蛋白，是多糖與蛋白質的結合體，具有很高的分子量，由雙糖的重復單元組成。冬蟲夏草多糖肽具有很強生物活性，初步研究多糖肽能增強機體免疫功能，具有抗腫瘤作用和抗氧化作用。但是，目前還未見對冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽快速、準確、易普及的檢測方法的記載。

發(fā)明內容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種直接測定冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽含量的方法，其采用的技術方案如下：

一種直接測定冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

(一)樣品處理

稱取冬蟲夏草產(chǎn)品適量，加水后進行水浴提取，待其冷卻后，加水定容成濃度為5.00mg/ml的冬蟲夏草產(chǎn)品水溶液，過濾該溶液，取部分濾液加無水乙醇后通過離心機離心，然后取沉淀物采用流動相溶解，過有機濾膜后得樣品溶液備用；

(二)高效液相色譜儀的測定

將步驟(一)所得樣品溶液取適量加入到高效液相色譜儀中進行測定，并對測定結果進行定性分析；

(三)標準曲線的制定

精密稱取干燥至恒重的冬蟲夏草多糖肽標準品0.0500g于10ml容量瓶中，用水溶解并定容，得濃度為5.00mg/ml的冬蟲夏草多糖肽標準備用液，然后分別取100μl、200μl、300μl、400μl、500μl標準備用液于5ml容量瓶中，加水定容，得到濃度分別為100.0μg/ml、200.0μg/ml、300.0μg/ml、400.0μg/ml、500.0μg/ml的標準工作液，將標準工作液通過高效液相色譜儀進行測定，所得數(shù)據(jù)以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，建立濃度-峰面積標準曲線，并得出標準方程。

(四)樣品中冬蟲夏草多糖肽含量的確定

根據(jù)濃度-峰面積標準曲線得出的線性方程，將步驟(二)中樣品溶液里所測得的冬蟲夏草多糖肽的峰面積換算為濃度，從而計算出該冬蟲夏草產(chǎn)品中的冬蟲夏草多糖肽含量。

進一步地，高效液相色譜儀測定時，液相色譜條件為：色譜柱為Atlantis?T3色譜柱，其規(guī)格為4.6×250mm、i.d..5μm，柱溫為35℃，流動相為體積分數(shù)為5％的甲醇水溶液，流速為1ml/min，進樣量為10μl，檢測器為二極管陣列檢測器，掃描波長為190nm—460nm。

進一步地，所述水浴提取的溫度為60℃，時間為30分鐘。

進一步地，所用離心機的轉速為9000rpm，離心時間為15分鐘。

進一步地，所用有機濾膜為0.22μm有機濾膜。

進一步地，所述冬蟲夏草產(chǎn)品包括冬蟲夏草藥材原料和冬蟲夏草保健食品。

通過上述技術方案的實現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種準確、簡便、快速、易普及的測定冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽的方法，本發(fā)明通過高效液相色譜二極管陣列檢測器對樣品進行定性與定量分析，前處理簡單便捷，無需繁瑣提取分離等除雜技術，為冬蟲夏草產(chǎn)品中冬蟲夏草多糖肽功效因子的鑒別分析、品質評價以及質量控制提供了有效途徑和可靠方法。

附圖說明

圖1為本發(fā)明中冬蟲夏草多糖肽標準品的色譜圖；

圖2為本發(fā)明中冬蟲夏草多糖肽標準品的光譜圖；

圖3為樣品中冬蟲夏草多糖肽的色譜圖；

圖4為樣品中冬蟲夏草多糖肽的光譜圖；

圖5為冬蟲夏草多糖肽的濃度-峰面積標準曲線。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明做更詳細的描述。

實施例1

采用本發(fā)明所提供方法對青海佳兌冬蟲夏草純粉樣品中的冬蟲夏草多糖肽進行測定。

1、測定所采用的儀器及藥品有：Waterse2695型高效液相色譜儀系統(tǒng)，Waterse2996型二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；冬蟲夏草多糖肽標準品(＞98％，國家菌草工程技術研究中心)；

2、測定步驟如下：

(一)樣品處理