[發(fā)明專利]一種快速提取純化檢測(cè)毛樣蛋白方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410318956.6
• 申請(qǐng)日: 2014-07-07
• 公開（公告）號(hào): CN104101524A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王小龍;陳玉林;周光現(xiàn);牛怡源;師丙波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種快速提取純化檢測(cè)毛樣蛋白方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣品分類，分別剪成小段；

(2)0.15％壬基酚聚氧乙烯(9)醚60℃清洗20min，吸干；

(3)超純水60℃清洗5min，吸干；

(4)二氯甲烷和乙醇洗常溫清洗20min，吸干；

(5)超純水60℃清洗5min，吸干；

(6)0.1M甲醇?jí)AKOH，室溫30min，吸干；

(7)超純水60℃清洗5min，吸干；

(8)磨碎：用水浸濕，液氮研磨；

(9)提?。?00μL?of7M尿素，2M硫脲，50mM?Tris，and50mM?TCEP，pH4，室溫，過(guò)夜消化；.

(10)純化步驟

1).向0.1ml蛋白溶液中加入0.4ml甲醇，渦旋，瞬時(shí)離心，10s；

2).再加入0.2ml氯仿，渦旋，瞬時(shí)離心，10s；

3)再加入0.3ml?ddH2O，劇烈震蕩，瞬時(shí)離心，1min；

4).小心棄掉上清，用槍吸；

5).加入0.3ml甲醇，渦旋，瞬時(shí)離心，2min，沉淀；

6).棄掉上清，倒置室溫干燥，干燥完成后保存?zhèn)溆茫?/p>

7).50-100微升5％SDS溶解蛋白，不容物可用蛋白上樣buffer溶解，備用，跑SDS-PAGE。

2.快速提取純化檢測(cè)毛樣蛋白方法，其特征在于，步驟(4)中所述二氯甲烷和乙醇洗的體積比為V/V2∶1。