[發(fā)明專利]一種金針菇青禾菌種的SSR標記指紋圖譜與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410318252.9
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104152547A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張丹;章爐軍;王瑞娟;陸歡;徐珍;尚曉冬;譚琦
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于金針菇菌種的檢測領(lǐng)域，特別涉及一種金針菇青禾菌種的SSR標記指紋圖譜與應(yīng)用。

背景技術(shù)

金針菇[Flammulina?velutipes(Fr.)Sing.]又名金菇、樸菇、構(gòu)菌、青杠菌、毛柄金錢菌，在分類上屬于傘菌目白蘑科小火焰菌屬。金針菇分布廣泛，營養(yǎng)豐富，是一種經(jīng)濟價值很高的食用菌和藥用菌，也是市場上十分走俏的天然保健食品之一。金針菇是中國主要栽培食用菌和現(xiàn)代工廠化生產(chǎn)主要食用菌之一，2013年國內(nèi)工廠化日生產(chǎn)量達到2700噸。

優(yōu)質(zhì)菌種在金針菇單產(chǎn)和質(zhì)量中的貢獻率舉足輕重，這決定了金針菇菌種在金針菇產(chǎn)業(yè)中的重要地位。1999年我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種知識產(chǎn)權(quán)，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產(chǎn)權(quán)，為了建立食用菌新品種登記制度來真正保護我國的品種產(chǎn)權(quán)，必須首先建立成熟的品種鑒定技術(shù)，為新品種登記奠定基礎(chǔ)。尤其日本2004年4月1日開始實行《種苗法修正案》，對我國食用菌尤其是金針菇的生產(chǎn)構(gòu)成了極大的威脅。就國內(nèi)而言，金針菇栽培菌種“同種異名，異種同名”的現(xiàn)象，不僅給菇農(nóng)帶來了極大的損失，影響了他們的栽培積極性，也極大地影響了中國金針菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展；而且，隨著大規(guī)模的工廠化栽培方式的出現(xiàn)，對金針菇栽培菌株質(zhì)量的要求越來越高，需要發(fā)展更為簡便、快速、準確的菌株鑒定技術(shù)，以保證每批次的用種都準確無誤。

面對這種局勢，就需要我們進一步加快菌種鑒定技術(shù)的研究，在金針菇的研究中建立更為有效的菌種鑒定體系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種金針菇青禾菌種的SSR標記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，該指紋圖譜與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點。

本發(fā)明的一種金針菇青禾菌種的SSR標記指紋圖譜，該指紋圖譜由6對SSR標記組成，是基于金針菇基因組簡單重復(fù)序列片段開發(fā)SSR引物，擴增帶型好，重復(fù)性高的SSR引物，標記詳細信息如表1。

表1?SSR標記詳細信息列表

本發(fā)明的一種金針菇青禾菌種的SSR標記指紋圖譜的應(yīng)用，是利用金針菇基因組簡單重復(fù)序列片段開發(fā)的6對SSR引物，通過對收集的24份國內(nèi)主要金針菇栽培品種的SSR引物帶型擴增，本發(fā)明確定了6對SSR引物在金針菇青禾菌種中擴增出的等位片段的數(shù)量并編號(表2)，通過不同SSR等位片段的編號組合可有效識別青禾菌種(圖2-7)。通過對照50bp?DNA?ladder可確定各SSR引物擴增的等位片段的相對分子量，存在青禾菌種特異SSR等位片段組合的菌種，即是金針菇青禾菌種，該菌種的編號組合為：2?(1+2)?(2+3+4)?1?(1+3+5)?3。

表2?SSR引物擴增的等位片段信息匯總表

有益效果

本發(fā)明與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點。檢測所需時間只需要3～4天，而常規(guī)的拮抗試驗所需時間至少需要兩周時間，出菇試驗則需要至少2個月的時間；該方法在所收集的我國24個金針菇主栽菌種中具有青禾菌種的專一性，具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為金針菇青禾菌種SSR標記指紋圖譜，其中M是50bp?DNA?ladder，數(shù)字代表的是所用的6對SSR引物，C是空白對照，箭頭所指的是金針菇青禾菌種的穩(wěn)定且特異的SSR等位片段組合；

圖2為引物Fv_fp0001在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜；

圖3為引物Fv_fp0002在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜；

圖4為引物Fv_fp0003在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜；

圖5為引物Fv_fp0004在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜；

圖6為引物Fv_fp0005在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜；

圖7為引物Fv_fp0006在所選金針菇栽培材料中的擴增圖譜。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

實施例1