[發(fā)明專利]擬香味類香味菌及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410318125.9
• 申請(qǐng)日: 2014-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN104263668A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孔凡玉;黃樹立;游偲;李錫宏;張成省;李青誠(chéng);陳德鑫;高加明;馮超;王靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所;中國(guó)煙草總公司湖北省公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01P3/00;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物菌種技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種擬香味類香味菌，及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

鏈格孢菌(Alternaria?alternate(Fries)Keissler)是一類重要的植物病原菌，寄主范圍廣，危害重，其引起的煙草赤星病是煙葉成熟后期重要的葉部病害，在我國(guó)各煙區(qū)均有發(fā)生，直接影響了煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量。關(guān)于煙草赤星病的防治，目前國(guó)內(nèi)主要以化學(xué)防治為主，但使用化學(xué)農(nóng)藥防治赤星病既導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染，又可引起病菌產(chǎn)生抗藥性以及嚴(yán)重的煙株藥害。生物防治由于其對(duì)環(huán)境友好而被認(rèn)為是替代化學(xué)殺菌劑防治植物病害的良好途徑，因此生防資源的篩選、利用和創(chuàng)新對(duì)于植物病害的生物防治具有重要意義。

微生物代謝產(chǎn)生的揮發(fā)性產(chǎn)物常具有抑菌、防病或兼具促生及誘導(dǎo)抗性等作用，是一類重要的生防資源。McCain于1966年最早報(bào)道了灰色鏈霉菌(Streptomyces?griseus)對(duì)Gleospriumaridum孢子形成具有抑制作用；Chen等研究發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)產(chǎn)生的揮發(fā)物能強(qiáng)烈抑制灰霉病菌(Botrytis?cinerea)孢子萌發(fā)和萌發(fā)管伸長(zhǎng)；Koitabashi分離到的Irpexlacteus產(chǎn)生的揮發(fā)物對(duì)Oiduim?sp.引起的溫室歐芹白粉病防治效果良好；Zhang等發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)GB03的揮發(fā)物能通過增強(qiáng)擬南芥(Arabidopsis)的光合作用對(duì)其產(chǎn)生促生作用。與非揮發(fā)性抗菌物質(zhì)相比，揮發(fā)性抗菌物質(zhì)具有滲透力強(qiáng)、分布均勻等優(yōu)點(diǎn)，防治作物病害效果更為突出、應(yīng)用領(lǐng)域更為廣闊；已有研究表明，包括真菌、細(xì)菌在內(nèi)的很多微生物都能產(chǎn)生揮發(fā)性抗菌物質(zhì)。

生物防治由于其對(duì)環(huán)境友好，且具有良好的防治效果，近年來(lái)成為防治植物病害的研究熱點(diǎn)。拮抗微生物是一類重要的生防資源，其產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)主要包括非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物和揮發(fā)性代謝產(chǎn)物兩種。目前，對(duì)于煙草赤星病菌的生物防治大多集中在產(chǎn)非揮發(fā)性抗菌物質(zhì)微生物的篩選和利用，而對(duì)于產(chǎn)揮發(fā)性抗煙草赤星病菌代謝產(chǎn)物微生物的研究則較少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出一種擬香味類香味菌，對(duì)煙草赤星病有較好的抑制和治療效果。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種擬香味類香味菌(Myroidesodoratimimus)的T45菌株，2014年4月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC9116。

一種如上所述擬香味類香味菌T45菌株的制備方法，包括以下步驟：

(1)取煙草根際土壤，加入蒸餾水，搖動(dòng)片刻，吸取上層液加入到無(wú)菌水中，制成懸液；

(2)取步驟(1)土壤懸濁液滴加到含2～5％利福平的LB固體培養(yǎng)基平板上，用涂布棒均勻涂布，并將培養(yǎng)基倒置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1～2天。

優(yōu)選的，所述LB固體培養(yǎng)基配方為：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L和瓊脂粉15g/L。

優(yōu)選的，(3)步驟(2)培養(yǎng)液涂布于LB固體培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)24h活化，劃線于LB肉湯培養(yǎng)液中28℃，150rpm震蕩培養(yǎng)24h。

一種如上所述擬香味類香味菌T45菌株在對(duì)煙草赤星病菌的抑制方面的應(yīng)用。

優(yōu)選的，包括以下步驟：

①.T45菌株的培養(yǎng)：取煙草根際土壤，加入蒸餾水，搖動(dòng)片刻，吸取上層液加入到無(wú)菌水中，制成懸液；取土壤懸濁液滴加到含2～5％利福平的LB固體培養(yǎng)基平板上，用涂布棒均勻涂布，并將培養(yǎng)基倒置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1～2天；分離到67株細(xì)菌，編號(hào)T1-T67，涂布于LB培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)24h活化，劃線獲得單菌落，挑取單菌落于LB肉湯培養(yǎng)液中28℃，150rpm震蕩培養(yǎng)24h；

②.病原菌培養(yǎng)：煙草赤星病菌邊緣的菌絲塊置于新鮮PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)7d進(jìn)行活化；

③.接種：在步驟②長(zhǎng)滿煙草赤星病菌的培養(yǎng)基上獲得菌絲塊，將其接種到PDA培養(yǎng)基平板上25℃培養(yǎng)12h；吸取步驟①細(xì)菌培養(yǎng)液均勻涂布于LB固體培養(yǎng)基平板上；將PDA培養(yǎng)基平板對(duì)扣置于LB固體培養(yǎng)基平板上方，并用封口膜密封兩塊平板邊緣，于25℃下培養(yǎng)5-7天。

優(yōu)選的，所述LB固體培養(yǎng)基配方為：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L和瓊脂粉15g/L。