[發明專利]一種快速鑒定轉基因水稻純合子的定量PCR法無效
| 申請號： | 201410317881.X | 申請日： | 2014-07-03 |
| 公開（公告）號： | CN104195225A | 公開（公告）日： | 2014-12-10 |
| 發明（設計）人： | 楊代常;汪相宏 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006 | 代理人： | 黃韌敏;黃萍 |
| 地址： | 430072*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 鑒定 轉基因 水稻 純合子 定量 pcr | ||
1.一種鑒定轉基因水稻純合子的定量PCR方法，其特征在于，所述定量PCR方法以水稻RBE4基因作為內參基因，以水稻基因組外源基因或內源基因作為目的基因，分別在相同的反應體系中進行定量PCR反應；并根據比較Ct值2-△△Ct法計算鑒別純合子或雜合子和基因拷貝數。
2.如權利要求1所述的定量PCR方法，其特征在于，所述內參基因的引物的核苷酸序列為：
正向：GTTTTAGTTGGGTGAAAGCGGTT；
反向：CCTGTTAGTTCTTCCAATGCCCTTA。
3.如權利要求1所述的定量PCR方法，其特征在于，所述定量PCR的反應體系為10μl的反應體系，包括：
定量PCR反應過程包括：95℃10min，1個循環；95℃10s，60℃20s，40個循環。
4.如權利要求1所述的定量PCR方法，其特征在于，當2-△△Ct接近于2時判斷為純合子；當2-△△Ct接近于1時判斷為雜合子。
5.如權利要求4所述的定量PCR方法，其特征在于，當鑒定單拷貝轉基因水稻的純合子時，其純合子和雜合子的鑒定準確率為100％。
6.如權利要求4所述的定量PCR方法，其特征在于，當鑒定雙拷貝轉基因水稻的純合子時，其純合子和雜合子的鑒定準確率為92.31％。
7.如權利要求1所述的定量PCR方法，在鑒別多基因疊加的轉基因水稻純合子中的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，對至少含有三種以上外源基因的轉基因水稻進行基因疊加分析。
9.如權利要求1所述的定量PCR方法，其特征在于，在鑒定轉基因水稻的外源基因拷貝數的應用。
10.如權利要求9所述應用，其特征在于，所述拷貝數鑒定的準確率100％。
11.如權利要求3所述的定量PCR方法，其特征在于，所述定量PCR?buffer?mix包含熒光染料SYBR?Green。
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