[發(fā)明專利]生物組織低溫保護(hù)劑及制備、使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410316055.3
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104054695A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 覃東立;張昌盛;李林海;王俊杰;張曉萌;鐘震宇;王玉濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: A01N1/00
• 分類號: A01N1/00
• 代理公司: 大慶知文知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23115
• 代理人: 吳江東

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物組織低溫保護(hù)劑及制備、使用方法。

背景技術(shù)

生物新鮮組織離開活體或者原來的生存環(huán)境后，生物體的內(nèi)源酶開始降解遺傳物質(zhì)，其降解速度與內(nèi)源酶含量及溫度有直接關(guān)系。目前，傳統(tǒng)的生物技術(shù)是在液氮環(huán)境或超低溫冰箱內(nèi)對生物標(biāo)本進(jìn)行保藏。然而，低溫環(huán)境中生物組織中的分解酶仍然會對組織進(jìn)行溶解破壞作用，使細(xì)胞及遺傳物質(zhì)不斷降解。

生物標(biāo)本的保藏是一項(xiàng)長久的工作，標(biāo)本的保存有的需要幾十年甚至上百年。降解的生物標(biāo)本既不能滿足科學(xué)研究的需要也不能系統(tǒng)恢復(fù)生物的生存屬性。所以，生物遺傳物質(zhì)的保存是生物標(biāo)本保藏的一項(xiàng)重要內(nèi)容，只有生物的遺傳信息得以完整有效的保存下來，才是對物種真正意義的保存。

目前傳統(tǒng)的保藏生物標(biāo)本遺傳信息的方法是進(jìn)行低溫保藏，低溫保護(hù)劑對標(biāo)本的保藏至關(guān)重要。研制無毒無刺激性的生物組織低溫保護(hù)劑對生物標(biāo)本遺傳信息的保藏有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能夠長期保持新鮮組織不變質(zhì)的生物組織低溫保護(hù)劑及制備、使用方法。

上述的目的通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種生物組織低溫保護(hù)劑，其組成包括：(NH₄)₂SO₄、NaCl、NaSO₄、NaNO₃、KBrO₃、超純水，所述的(NH₄)₂SO₄的重量份數(shù)為300-400 ，所述的NaCl的重量份數(shù)為2-3 ，所述的NaSO₄的重量份數(shù)為18-25 ，所述的NaNO₃的重量份數(shù)為0.2-0.3 ，所述的KBrO₃的重量份數(shù)為0.1-0.2，所述的超純水的重量份數(shù)為1000 。

所述的生物組織低溫保護(hù)劑，所述的(NH₄)₂SO₄的重量份數(shù)為300 ，所述的NaCl的重量份數(shù)為2，所述的NaSO₄的重量份數(shù)為18 ，所述的NaNO₃的重量份數(shù)為0.2 ，所述的KBrO₃的重量份數(shù)為0.1 。

所述的(NH₄)₂SO₄的重量份數(shù)為400 ，所述的NaCl的重量份數(shù)為3 ，所述的NaSO₄的重量份數(shù)為25 ，所述的NaNO₃的重量份數(shù)為0.3 ，所述的KBrO₃的重量份數(shù)為0.2 。

所述的(NH₄)₂SO₄的重量份數(shù)為350 ，所述的NaCl的重量份數(shù)為2.5 ，所述的NaSO₄的重量份數(shù)為20，所述的NaNO₃的重量份數(shù)為0.25 ，所述的KBrO₃的重量份數(shù)為0.15 。

一種生物組織低溫保護(hù)劑的制備方法，采用超純水作為介質(zhì)，第一步稱取(NH4)2SO4的重量份數(shù)為300-400 ，加入600重量份數(shù)的超純水中；第二步稱取NaCL的重量份數(shù)為2-3 、NaSO4的重量份數(shù)為18-25 和NaNO3的重量份數(shù)為2-3 ，依次加入300重量份數(shù)的超純水中；第三步稱取KBrO3的重量份數(shù)為0.1-0.2 ，再加入100重量份數(shù)的超純水中；將上述三步所得的三種試劑各用玻璃棒攪拌1min, 超聲波超聲20min；然后將第二步、第三步兩種試劑依次緩慢加入第一步的試劑中，邊加邊用玻璃棒攪拌，最后用超聲波在超聲10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

一種生物組織低溫保護(hù)劑的使用方法，第一步生物標(biāo)本組織切塊，第二步將切好的生物標(biāo)本在室溫下用生物組織低溫保護(hù)劑浸泡，使溶液滲入細(xì)胞制成樣本，第三步將樣本在溫度為4℃放置6小時，第四步將樣本移入-20℃或-86℃環(huán)境下進(jìn)行長期保存。

有益效果：

1.本發(fā)明可迅速滲入組織進(jìn)行細(xì)胞和遺傳物質(zhì)（DNA和RNA）的保護(hù)；保護(hù)液迅速的保護(hù)作用確保了生物標(biāo)本用作科學(xué)研究的基因表達(dá)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性；樣本能夠長期保護(hù)，即使是多次反復(fù)凍融，遺傳物質(zhì)也不會降解；可對生物標(biāo)本進(jìn)行低溫有效長期保藏。

2.本發(fā)明在低溫環(huán)境中對標(biāo)本進(jìn)行保護(hù)，在細(xì)胞水平與分子水平一同來對生物標(biāo)本進(jìn)行保護(hù)，真正做到生物標(biāo)本的有效保藏。