[發明專利]一種基于生物效價的降血脂類中藥質量評價方法

在審

• 申請號: 201410315623.8
• 申請日: 2014-07-03
• 公開（公告）號: CN105319332A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 周亞偉
• 申請（專利權）人: 周亞偉
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/92
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于中藥質量控制與評價技術領域，特別涉及一種基于生物效價測定的中藥質量評價方法，更特別的是，涉及中藥的降血脂活性檢測方法以及降血脂中藥的生物質量評價方法。

背景技術

相比化學藥而言，中藥成分非常復雜，其質量標準的現代化與國際化一直是困擾中藥發展的核心，而建立完善的質量標準的關鍵是建立科學、可靠的質量控制與評價方法。現階段中藥質量的控制與評價以化學成分的定性定量分析為主要手段。隨著中藥研究的不斷深入，發現這種模式在中藥質量控制和評價體系中逐漸顯現出了非常大的局限性。例如測定小檗堿不能確認是黃連還是黃柏，單獨依靠它們的含量多少也不能準確反映藥材質量的優劣。又如單一成分姜黃素含量高低，不能代表姜黃這味藥材質量的好壞，更不能整體反映含有姜黃的復方制劑，例如降脂通脈膠囊的降血脂活性高低。以個別或部分指標性成分的含量作為質量標準的一項指標，雖然可以對指標性成分的量進行控制，但僅僅是控制了其中的某一或某些成分的量，難以保證所有成分的穩定性和一致性，更難以體現中藥的整體生物效應，保證其臨床療效的一致性。因此，近年來提出將生物活性檢測應用于中藥質量控制與評價體系中，并且已有文獻報道了板藍根、大黃、桔梗等藥材相關生物效價的測定方法并建議藥材質量標準中加入生物活性測定項，以彌補化學檢測手段的缺陷。生物效價測定法作為一種基于生物活性測定的質量分析手段，其有望成為一種真正符合中醫藥傳統理論、體現中藥臨床應用特點、保證中藥安全有效的質量控制與評價方法。

但是，目前生物效價測定法在中草藥領域的研究成果鮮見報道，而對于中藥降血脂藥物的生物效價的測定方法，或者基于生物效價測得的降血脂類中藥的質量評價或檢測方法目前尚未見報道。

羅容在其博士研究生學位論文《枳實降血脂藥效組分生物效應評價方法研究》中研究了枳實降血脂藥效組分及其生物效應，先用體內試驗證明了枳實具有降血脂生物活性，然后選取和高血脂相關的體外生物效應指標研究枳實及其藥效組分的降血脂效應，其所采用的體外生物效應指標為抗氧化指標，即①采用Ox-LDL損傷HUVEC模型，研究枳實及其藥效組分對HUVECICAM-1分子表達和NO釋放的影響；②采用H2O2和t-BOOH誘導的HepG2細胞氧化損傷模型，研究枳實及其藥效組分對LDH漏出、MDA含量、T-AOC、Cu-Zn-SOD活力、GSH-Px活力、CAT活力影響；③利用流式細胞技術，研究枳實及其藥效組分對MMP的影響；④利用單細胞凝膠電泳，研究枳實對H2O2和t-BOOH誘導的HepG2細胞DNA氧化損傷的保護作用。通過降血脂體外生物效應的測定并結合HPLC方法，確定了枳實降血脂的藥效組分：以柚皮苷-橙皮苷-枸橘苷-新橙皮苷-柚皮素-橙皮素(223.66：18.50：254.49：321.00：4.46：1)為基準的一個范圍，該藥效組分與枳實藥材降血脂生物效應具有等效性，因此，該藥效組分可以表述枳實降血脂臨床療效的品質特征。故可用枳實藥效組分的生物效應作為效應標準，來評價枳實藥材的內在質量，即將待評價樣品用完全相同的生物效應測定方法檢測，并與此效應標準比較，計算生物效應比。本研究還以生物效應比(BER)作為指標評價藥品的優劣，1≥BERS≥0.9且經數理學比較與效應標準無差異，為合格藥品；BERS>1且經數理學比較與效應標準無差異為優質藥品；BERS<0.9或經數理學比較與效應標準有差異為不合格藥品。

上述現有技術通過采用抗氧化指標法和細胞間粘附分子表達法構建其生物效應評價方法，而這些體外藥理模型與降血脂癥并無直接關聯，抗氧化作用對應的適應癥非常廣泛，并不能直接關聯降血脂藥效，因此該現有技術的方法專屬性不強，有待尋找更為確切地表達降血脂療效的體外模型和評價指標。