[發明專利]利用超聲波技術提高桑黃菌菌絲發酵胞內多糖產量的方法

有效

• 申請號: 201410315272.0
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104087629B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 馬海樂;張赫男;戴俏武;任曉峰;李云亮
• 申請（專利權）人: 江蘇大學;江蘇大學附屬醫院
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發明屬于食品加工技術領域，特別涉及一種利用超聲波輔助桑黃菌菌絲發酵提高胞內多糖的方法。

背景技術

桑黃菌屬于擔子真菌在中醫中是最重要的藥用蘑菇之一。多年來桑黃菌在中國，日本，韓國等國家有著廣泛的應用。近來，桑黃菌的藥用價值備受全世界矚目，同時吸引了大量的科研工作者致力于此。多糖被認為是桑黃菌中主要的活性成分，其顯示出對健康影響和藥理活性的廣譜性，如抗腫瘤，免疫調節，抗氧化等藥用功能。由于野生桑黃菌資源有限，桑黃菌菌絲體的固態和液態深層發酵成為該真菌資源的重要來源。對于獲得菌絲體和穩定的生物活性產物如多糖，液態深層發酵相比于固態發酵更有效。因此，通過研究桑黃菌液態深層培養條件來開發一種新穎，高效獲得桑黃菌多糖產物的方法成為備受關注的課題。

近年來，高強度的超聲波作為一種經濟，簡單，有效的工業手段經常被用來提高活細胞生物產量和生物活性酶產量。有研究表明超聲處理在促進細菌，真菌，和植物培養過程中產生有價值產物起著重要的作用。例如高強度的超聲波（20?KHz）對牛奶發酵過程中的糖代謝有著積極的影響，并且在Bifidobacterium?lactis發酵牛奶的后期可以促進主要的有機酸合成(Nguyen,?Lee,?&?Zhou,?2012)。有研究表明一種間歇有效的高強度超聲處理可以顯著促進Trametes?versicolor菌絲培養過程中漆酶的產量?(Wang,?Ma,?Guo,?Zhuang,?&?Liu,?2013)。但是迄今為止通過利用超聲波處理提高桑黃菌菌絲發酵胞內多糖產量的文章或專利尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用高強度的間歇超聲波來促進桑黃菌菌絲發酵胞內多糖的方法。

實現本發明的技術如下：

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種利用超聲波來促進桑黃菌菌絲發酵胞內多糖的方法，按照下述步驟進行：

（1）????培養基及桑黃菌菌絲體培養條件

桑黃菌菌株（Phellinus?igniarius），被接種在無菌PDA斜面（PDA培養基配方：馬鈴薯浸1000ml，葡萄糖?20g，瓊脂?20g,?pH自然）上26℃培養，一周后將從斜面上切除5塊大約為5×5mm的菌絲，并接種于250ml的三角燒瓶中，其中含有100ml無菌種子培養基（PDA液體培養基配方：馬鈴薯浸1000ml，葡萄糖?20g，pH自然），搖床轉速為130轉/分鐘，26℃培養?8天后利用均質器使培養液中菌絲球分散均勻作為種子液。將種子培養液按10%（v/v）接種量接種至含有100ml無菌發酵培養基的250ml三角燒瓶中，發酵培養基的組成成分（g/L）如下：小麥粉（50），?麩皮（15），桑枝粉（10），KH₂PO₄?(2),?MgSO₄?(1).?三角燒瓶置于搖床上130轉/分鐘，26℃培養并進行超聲波輔助處理。

（2）超聲波處理

超聲波水浴溫度控制在26℃。超聲波在菌絲發酵不同階段（2~6d）進行處理，超聲波處理的頻率和功率分別設定為68?kHz和600W，超聲波處理時間為30min~90min，超聲間歇比為20?s/5?s～30?s/5?s。在超聲處理結束后，迅速將樣品返回至搖床上上持續培養，總發酵時間為8d。

本發明采用超聲波技術輔助桑黃菌菌絲體發酵，對菌絲體胞內多糖含量進行了測定。經過超聲波處理可以顯著提高桑黃菌菌絲體發酵過程中胞內多糖的含量（2.51%~22.67%），過程簡單、高效。

附圖說明

圖1為本發明所使用的超聲設備圖，其中1為電腦控制器；2為超聲波發生器；3為水容器；4為樣品；5為轉換器；6為進水口；7為溫控系統；8為出水口。

具體實施方式

本發明所使用的超聲設備如圖所示（圖1）。超聲波發生器2以及對應的可以拆卸的轉換器5；電腦控制器1可以數字化設定超聲波作用參數，超聲波發生器2通過電腦控制器1進行控制；7為本發明中設備的溫控系統，根據工作需要調節水容器3中的水溫；溫控水從入口6進入，從出口8流出。當進行超聲波處理時，將樣品4置于超聲波轉換器5的中心位

置，水容器3的水液面和樣品4的培養液液面在同一水平。

本發明桑黃菌菌株（Phellinus?igniarius）購自國家普通微生物菌種保藏中心編號為5.95。