[發明專利]一種甲羥孕酮人工抗原的合成方法

有效

• 申請號: 201410313996.1
• 申請日: 2014-07-03
• 公開（公告）號: CN104130325A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 胥傳來;孔娜;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲
• 申請（專利權）人: 無錫杰圣杰康生物科技有限公司;江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種甲羥孕酮人工抗原的合成方法，其特征在于以甲羥孕酮為原料，通過氫氧化鉀和二溴乙酸進行取代，得到甲羥孕酮半抗原，利用混合酸酐法將其與載體蛋白BSA偶聯，得到甲羥孕酮人工抗原；

具體合成步驟：

（1）甲羥孕酮半抗原的制備：取甲羥孕酮0.1mmol溶解于3mL無水二甲亞砜中為A液，二溴乙酸0.2mmol溶解于1.4mL無水二甲亞砜中為B液，A液中加入氫氧化鉀粉末1.5mmol，室溫條件下攪拌至溶液顏色變為微黃色，將B液逐滴加入到A液中，黃色逐漸加深，溴取代甲羥孕酮17位羥基上的H鍵，成為帶有羧基的甲羥孕酮半抗原，室溫反應4h，用50mL冰水終止反應，乙酸乙酯萃取三遍，合并水相，將水相用2mol/L鹽酸酸化得黃色沉淀，水洗四遍至中性，干燥后得到黃色甲羥孕酮半抗原MP-2CME粉末；

（2）甲羥孕酮人工抗原的制備：稱取甲羥孕酮半抗原0.01mmol溶解于600μL無水N,N-二甲基甲酰胺DMF中，置于4℃冰浴中攪拌，溶液預冷后加入0.025mmol三正丁胺，冰浴條件攪拌30min，加入0.025mmol氯甲酸異丁酯，繼續冰浴攪拌1h，得活化后小分子溶液C液；稱取載體蛋白BSA?10.6mg，溶解于pH?9.6的碳酸鹽緩沖液CBS中，得蛋白溶液；在冰浴條件下，將小分子溶液C液逐滴滴加到蛋白溶液中，反應8h；反應結束后，將溶液離心，取上清，得到甲羥孕酮人工抗原混合液；

剪取透析袋煮沸消毒，將甲羥孕酮人工抗原混合液移入到透析袋中，用0.01M?pH?7.4的磷酸鹽緩沖液PBS透析三天，期間每天換液三次，透析結束后取出甲羥孕酮人工抗原分裝在1mL的無菌的離心管，在-20℃保存，備用；

該甲羥孕酮人工抗原作為免疫原，將載體蛋白換為OVA，方法不變，合成的完全抗原為包被原。