[發(fā)明專利]一種抗腫瘤肽變體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410312285.2
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104130311A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬海龍
• 申請（專利權(quán)）人: 馬海龍
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及抗腫瘤肽變體。

背景技術(shù)

ND100是由1Ala、1Glu、1Gly、1Leu、2Pro、1Thr、1Tyr組成的八肽。體外及體內(nèi)試驗均表明ND100具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，可用來制備抗腫瘤藥物，用于治療腫瘤。

在現(xiàn)有技術(shù)中，為了提高多肽的活性，針對多肽序列進(jìn)行特異性的改變，從而尋找活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該多肽的生物活性，申請人通過大量的實驗，針對多肽序列進(jìn)行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的變體。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及的多肽，序列如下：

NC：AlaGluGlyLeuProProThrTyr；

(NC1)：AlaGluGlyLeuProProThrIle；

(NC2)：AlaSerGlyLeuProProThrTyr；

(NC3)：AlaGluGlyLeuProSerThrTyr；

(NC4)：AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr；

(NC5)：AlaGluGlyGlyLeuProProProThrTyr；

(NC6)：GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr；

(NC7)：AlaGlyGlyLeuProProThrTyr；

(NC8)：GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr；

(NC9)：AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；

(NC10)：GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；

(NC11)：GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；

(NC12)：AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；

(NC13)：AlaGlyGlyLeuProProProThrIle；

對照1：AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr；

對照2：AlaLeuGlyLeuProProThrTyr；

本發(fā)明的多肽合成后，可以做成游離態(tài)形式，也可以做成陽離子鹽，如：TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。

本發(fā)明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治療。這些藥物劑型涵蓋：注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。

具體實施方式

實施例1：本發(fā)明多肽的人工化學(xué)合成

本發(fā)明的肽的制備采用液相合成法和活化酯逐個增長法，將本發(fā)明的肽的C端的第二個氨基酸的氨基用Boc基(叔丁氧羰酰基)保護(hù)，羧基用HOSu(N-羥基琥珀酰亞胺)活化，然后在KHCO₃溶液中與C端第一個氨基酸在30℃水浴，反應(yīng)2天。抽去有機(jī)溶劑，在冰浴中用2mol/LHCl調(diào)pH3～4(沉淀最多時)，用乙酸乙酯抽提，飽和NaCl洗3次，無水Na₂SO₄干燥，抽干，無水乙醚研磨，得帶保護(hù)基的二肽。用50％TFA(三氟醋酸)處理，脫去Boc基，再與N端帶Boc保護(hù)基，C端用HOSu活化的C端的第三個氨基酸縮合，用同樣的方法逐個接上氨基酸，最后用催化氫化法脫去Glu側(cè)鏈上的保護(hù)基，用50％TFA脫去本發(fā)明肽N端的Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC進(jìn)行分離純化，可得98％純度的本發(fā)明的多肽。經(jīng)過電噴霧質(zhì)譜測定，其序列與目標(biāo)序列完全一致。

實施例2：ND100的抗腫瘤活性

(1)體外活性測定：

采用細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞計數(shù)的方法，人肝癌細(xì)胞7721、胃癌細(xì)胞MKN、肺癌細(xì)胞A549以各自常規(guī)的培養(yǎng)基，視不同情況加入10％左右的小牛血清，用T-25培養(yǎng)瓶在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中單層培養(yǎng)。