[發明專利]能源作物荻抗鹽基因MsVP2及其植物表達載體和構建方法

有效

• 申請號: 201410311794.3
• 申請日: 2014-06-30
• 公開（公告）號: CN104178503B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發明（設計）人: 宗俊勤;劉建秀;陳煜;陳靜波;李蘭蘭;郭愛桂
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/14;C12N15/66;C12N15/82;A01H5/00
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1.荻耐鹽基因MsVP2，其特征在于該基因的序列為SEQ?ID?NO.1。

2.荻耐鹽基因MsVP2的植物表達載體，其特征在于由權利要求1所述的荻耐鹽基因MsVP2與植物表達載體構成。

3.根據權利要求2所述的荻耐鹽基因MsVP2的植物表達載體，其特征在于所述的植物表達載體為Sal?I和Not?I雙酶切MsVP2后插入到gateway入門載體pENTR1A，經線性化后與pEarleyGate103表達載體質粒進行重組反應得到。

4.權利要求2或3所述的荻耐鹽基因MsVP2植物表達載體的構建方法，其特征在于包括如下步驟：

1)荻耐鹽基因MsVP2的克隆

以荻幼嫩葉片為材料，提取總RNA，反轉錄為eDNA，設計引物擴增MsVP2基因，上游引物MsVP2-F：5′-ATGATGGAAGAAGACGTGGA-3′

下游引物MsVP2-R：5′-CAAGAATATTGGTGCCATGACC-3′

以反轉錄的eDNA為模板，以MsVP2-F和MsVP2-R為引物，進行聚合酶鏈式PCR反應，產物連接到pMD19-T?Simple載體，轉化TOP10感受態細胞，測定的序列為SEQ?ID?NO.1；

2)植物表達載體pEarleyGate103-MsVP2的構建

設計引物以荻eDNA為模板，用高保真酶進行PCR反應，在MsVP2基因的上游和下游分別引入Sal?I和Not?I酶切位點，

上游引物MsVP2-gateway-F：5′-GCGTCGACATGATGGAAGAAGACGT-3′

下游引物MsVP2-gateway-R：5′-TTGCGGCCGCGACAAGAATATTGGTGCCAT-3′

PCR產物連接到pMD19-T?Simple載體，轉化TOP10感受態細胞，提取陽性質粒，Sal?I和Not?I雙酶切的MsVP2片段與Sal?I和Not?I雙酶切的pENTRlA連接，轉化，提取的陽性質粒經NsiI單酶切線性化后與pEarleyGate103載體質粒進行LR重組反應，轉化，提取陽性質粒，電泳檢測并測序驗證為SEQ?ID?NO.1，植物表達載體pEarleyGate103-MsVP2構建成功。

5.權利要求1所述的荻耐鹽基因MsVP2在創建耐鹽新種質中的應用。

6.權利要求2所述的植物表達載體在創建耐鹽新種質中的應用。