[發明專利]寡核苷酸功能化熒光納米碳點、其制備方法及用途

在審

• 申請號: 201410311309.2
• 申請日: 2014-07-02
• 公開（公告）號: CN105219383A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: 郭磊;謝劍煒;李慧;徐華;唐吉軍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所
• 主分類號: C09K11/65
• 分類號: C09K11/65;C09K11/02;G01N21/64
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 劉向昕

1.寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其在熒光納米碳點上偶聯有寡核苷酸片段。

2.權利要求1的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其是具有羧基修飾末端的熒光納米碳點與具有氨基、羥基氨基、肼基、巰基或醛基修飾末端的寡核苷酸片段偶聯而成。

3.權利要求2的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，所述的熒光納米碳點通過酰胺鍵(-CO-NH-)與寡核苷酸片段偶聯。

4.權利要求1-3任一項的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其中所述的熒光納米碳點以檸檬酸為碳源。

5.權利要求4的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其中所述的熒光納米碳點按照以下方法制備得到：

a)取適量檸檬酸，進行加熱，溫度從室溫以均勻速率(例如2-20℃/min、例如2℃/min、5℃/min、10℃/min、20℃/min)上升至150-300℃，例如200℃-250℃，保持于該溫度使檸檬酸完全碳化(例如碳化1.5-3h，例如2h)，得到碳化物；

b)或者取適量檸檬酸，用水溶解得到檸檬酸水溶液，加熱至180-260℃，例如200℃-240℃，水熱反應1.5-3h，例如2h；

c)取步驟a)得到的碳化物，用水溶解，得到溶液；

d)取步驟b)或c)得到的溶液，經適宜孔徑濾膜過濾后，以截止分子量為1000－3000(例如1000)的透析膜進行透析；

e)收集透析液，凍干，得到固體，該固體即為熒光納米碳點(或稱為熒光納米碳點材料)，任選地，以水溶解配制得到熒光納米碳點溶液。

6.權利要求1-3任一項的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其中所述的寡核苷酸片段長度為5-200nt，例如為10-100nt，例如為20-80nt。

7.權利要求1-3任一項的寡核苷酸功能化熒光納米碳點，其粒徑為1-100nm，例如為10-30nm，例如為20-30nm。

8.權利要求3-7任一項的寡核苷酸功能化熒光納米碳點的制備方法，其包括以下步驟：

1)取適量末端修飾(例如末端氨基、羥基氨基、肼基、巰基或醛基修飾)的寡核苷酸片段，溶于適宜的中性兩性電解質緩沖液中，加熱變性后迅速冷卻；

2)取適量末端經羧基修飾的熒光納米碳點溶液，然后加入到經步驟1)處理后的寡核苷酸溶液中，混勻，任選地，在加入到寡核苷酸溶液前還包括對熒光納米碳點溶液進行預超聲分散的步驟；

3)加入適量偶聯劑(例如EDC、EDC/NHS、DCC、DCC/NHS或DCC/HOBt偶聯劑)，反應一段時間，去除反應后的溶液中未反應的碳點及過量偶聯劑，即得到寡核苷酸功能化熒光納米碳點。

9.權利要求8的制備方法，其中所述的末端經羧基修飾的熒光納米碳點按照以下方法制備得到：

a)取適量檸檬酸，進行加熱，溫度從室溫以均勻速率(例如2-20℃/min、例如2℃/min、5℃/min、10℃/min、20℃/min)上升至150-300℃，例如200℃-250℃，保持于該溫度使檸檬酸完全碳化(例如碳化1.5-3h，例如2h)，得到碳化物；

b)或者取適量檸檬酸，用水溶解得到檸檬酸水溶液，加熱至180-260℃，例如200℃-240℃，水熱反應1.5-3h，例如2h；

c)取步驟a)得到的碳化物，用水溶解，得到溶液；

d)取步驟b)或c)得到的溶液，經適宜孔徑濾膜過濾后，以截止分子量為1000－3000(例如1000)的透析膜進行透析；

e)收集透析液，凍干，得到固體，，該固體即為末端經羧基修飾的熒光納米碳點(或稱為熒光納米碳點材料)，任選地，以水溶解配制得到末端經羧基修飾的熒光納米碳點溶液。

10.權利要求1-7任一項的寡核苷酸功能化熒光納米碳點在體內/體外用于標記、示蹤、定位、傳感或靶向的用途。