[發明專利]一種包埋有凝血相關酶的水凝膠微球

有效

• 申請號: 201410310279.3
• 申請日: 2014-07-01
• 公開（公告）號: CN105213317B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 馬小軍;韓雅玲;于煒婷;梁明;鄭會珍;榮晶晶
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: A61K9/16
• 分類號: A61K9/16;A61K38/48;A61K47/36;B01J13/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明公開了一種包埋有凝血相關酶的水凝膠微球及其制備工藝。制得的微球粒徑100?1000微米，粒徑均一(CV<20％)，凝血相關酶均勻分布在水凝膠微球中，凝血相關酶與海藻酸鈉的質量比1:3?4:1，除水后凝血相關酶的載藥量在25％?80％。

技術領域

本發明涉及一種水凝膠微球，特別是一種包埋有凝血相關酶的水凝膠微球。

背景技術

目前報道的包埋有凝血相關酶的微球都是干燥微粒產品，其制備方法采用的是乳化-交聯法先制得微球，再通過微球吸附凝血酶后干燥制得包埋有凝血酶的微球(參考文獻：海藻酸鈉_殼聚糖固定化凝血酶微球的制備及穩定性研究，解放軍藥學學報，2012年，第28卷，第4期)。該方法的缺點如下：交聯劑的引入需要二次乳化，易發生破乳導致微球產量大大降低；制備過程中引入有機相和醋酸溶液易影響酶活性；制備過程引入大量油性物質，從而限制了產品的應用范圍；凝血酶的包埋采用吸附法，導致凝血酶的載藥量有限，凍干后產品中最高載藥量僅為23％，最高包封率為61％。由于海藻酸鈣水凝膠微球中除酶外的固形物即為海藻酸鈉，因此，公開技術的產品中酶與海藻酸鈉的質量比最高為1:3.3，太低的載藥量極大影響微球藥效的發揮。

發明內容

針對上述問題，本發明提出一種包埋有凝血相關酶的水凝膠微球制備新工藝。

該工藝包括如下步驟：

A配制海藻酸鈉溶液(濃度10-30g/L)；

B將凝血相關酶溶解到步驟A制備的海藻酸鈉溶液中，凝血相關酶的濃度為10-40g/L，即得含有凝血相關酶的海藻酸鈉溶液；

C配制凝膠浴水溶液，凝膠浴中含有總濃度5-30g/L氯化鈣或氯化鋇的一種或兩種，凝膠浴水溶液還含有總濃度1-20g/L氯化鈉或氯化鉀中的一種或二種；凝膠浴水溶液還含有總濃度0.5-20g/L檸檬酸鈉或磷酸鈉或磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉中的一種或二種以上；凝膠浴水溶液還含有總濃度1-30g/L吐溫或F68中的一種或二種；

D在高壓靜電場下，將步驟B配制的含有凝血相關酶的海藻酸鈉溶液形成均勻的射流液滴，液滴進入步驟C配制的凝膠浴溶液中，發生凝膠化反應，即得包埋有凝血相關酶的海藻酸鹽水凝膠微球。

其中，所述凝血相關酶，包括凝血酶或血凝酶中的一種或兩種。

所述海藻酸鹽，分子量10kDa-2000kDa，包括海藻酸鈣鹽或海藻酸鋇鹽中的一種或二種，也可同時包含或不包含海藻酸鈉鹽或鉀鹽中的一種或二種。

所述包埋有凝血相關酶的海藻酸鹽水凝膠微球可進一步與聚陽離子溶液交聯反應，在微球表面形成聚電解質絡合膜。

具體步驟為：

1)：將包埋有凝血相關酶的海藻酸鹽水凝膠微球投入到聚陽離子溶液中，微球與聚陽離子溶液的體積比為1:2-1:10，旋轉震蕩，讓微球在溶液中處于均勻懸浮狀態，進行聚電解質絡合反應2-60分鐘。

2)：微球與聚陽離子反應液分離，收集微球，生理鹽水清洗后即獲得包埋有凝血相關酶的海藻酸鹽-聚陽離子微球。

所述聚陽離子包括殼聚糖及其衍生物，α或ε聚賴氨酸，聚鳥氨酸、聚精氨酸，聚胺及其衍生物、聚酰胺及其衍生物、聚酰亞胺及其衍生物，及上述聚陽離子的共聚物，聚陽離子分子的分子量在1kDa-500kDa，聚陽離子溶液濃度0.2-20g/L。

制得的微球粒徑100-1000微米，粒徑均一(CV&lt;20％)，凝血相關酶均勻分布在水凝膠微球中，含有凝血相關酶的海藻酸鈉水凝膠微球中凝血相關酶與海藻酸鈉的質量比1:3-4:1。按照公開文獻(參考文獻：海藻酸鈉_殼聚糖固定化凝血酶微球的制備及穩定性研究，解放軍藥學學報，2012年，第28卷，第4期)方法計算本發明中微球除水后載藥量為25％-80％，最低載藥量比公開技術的最高值還要高。