[發(fā)明專利]結核分枝桿菌藥敏指示劑的使用方法

有效

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• 申請日: 2010-08-23
• 公開（公告）號: CN104178550A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設計）人: 彭鈞
• 申請（專利權）人: 湖南省天騎醫(yī)學新技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

?本發(fā)明涉及對結核分枝桿菌的耐藥性進行試驗的醫(yī)學檢驗領域，具體為一種結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法。

背景技術

結核病的耐藥性是一個日益嚴重的公共衛(wèi)生問題，嚴重威脅著結核病的控制。中國工程院院士鐘南山在兩會期間曾稱，中國其有450萬活動性結核病人，帶菌者高達5.5億，而帶菌者一生中有10％的可能性會發(fā)病。2009年4月，中國衛(wèi)生部部長陳竺在北京舉行的“耐多藥／廣泛耐藥結核病高負擔國家”部長級會議上通報了中國耐藥結核病的情況：中國疾病防控中心的抽樣調查顯示，中國結核病人中，耐多藥發(fā)病率為8.32％，總計約為12萬人，居世界第二位，廣泛耐藥發(fā)病率為0.68％，總計大約1萬人，其危害遠遠超過艾滋病。藥敏試驗是對結核分枝桿菌的耐藥性進行檢測的重要試驗。現有的結核分枝桿菌藥敏試驗方法，一般有紙片檢驗法和濃度檢驗法。紙片檢驗法是通過觀察由于貼在固體培養(yǎng)基表面上藥物紙片形成的藥物抑菌圈來確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性；濃度檢驗法是通過觀察檢測不同藥物和不同藥物濃度試驗容器中結核分枝桿菌的生長情況來確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。不管是紙片檢驗法還是濃度檢驗法，其整個藥敏試驗過程一般可分為標本前處理、增殖或分離培養(yǎng)和藥敏檢驗三個階段。現有的紙片檢驗法，標本前處理階段的步驟為：①用吸管吸取提供的標本置于試驗容器中；②向試驗容器中加入消化液，對標本粘液進行消化，使標本中粘液和雜質包裹的細菌充分暴露；③離心分離，倒掉上清液，獲得濃集的標本；在獲得濃集的標本后再進行增殖或分離培養(yǎng)。增殖或分離培養(yǎng)階段的步驟為：④取已經濃集的標本少部分制成濃菌液；⑤將濃菌液接種于固體培養(yǎng)基例如羅氏培養(yǎng)基上進行增殖或分離培養(yǎng)，一般需在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1月左右，把單個細菌培養(yǎng)成細菌菌落；在獲得細菌菌落后再進入藥敏檢驗階段。藥敏檢驗階段的步驟為：⑥取少量的細菌菌落，一般是取1――3個細菌菌落，將其溶解分散制成濃菌液；⑦將濃菌液接種于固體培養(yǎng)基例如瓊脂培養(yǎng)基表面上；⑧在固體培養(yǎng)基表面上貼上藥物紙片；⑨放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1個月左右，觀察藥物抑菌圈，確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。現有的紙片檢驗法的優(yōu)點是操作方便、設備簡單、投資小；但其存在以下缺點：⑴整個檢驗所需的時間太長：增殖或分離培養(yǎng)階段需要1個月左右，藥敏檢驗階段大約需要1個月左右，整個試驗過程大約需要2個月左右。如果在藥敏試驗得到結果后再使用藥物治療，就會嚴重影響治療時機。而臨床上在沒有藥敏試驗的情況下使用藥物治療一是可能會造結核分枝桿菌耐藥的嚴重后果；二是對感染耐藥性結核分枝桿菌的結核病患者很難達到好的治療效果。⑵不安全。整個試驗需要兩次人工接種，由于結核分枝桿菌具有傳染性，這樣對操作人員形成安全隱患，對環(huán)境形成污染隱患。

現有的濃度檢驗法，其在增殖培養(yǎng)階段采用固體培養(yǎng)基，其標本前處理、增殖或分離培養(yǎng)二個階段的步驟與現有的紙片檢驗法相同，但藥敏檢驗階段的步驟與現有的紙片檢驗法不同，具體為：從固體培養(yǎng)基上取增殖或分離培養(yǎng)獲得的細菌菌落，一般是取1個或數個細菌菌落，→→將其溶解分散制成菌懸液→→將菌懸液倒入按不同的藥物和不同的濃度配制成的多個試驗容器中，制成對比試驗標本→→觀察檢測試驗容器中細菌生長情況，確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。這種檢驗方法的優(yōu)點是設備簡單、投資小；但其存在以下缺點：⑴所需的時間長。增殖或分離培養(yǎng)階段的方法和步驟與現有的紙片檢驗法的方法和步驟相同，因此，僅增殖或分離培養(yǎng)階段所需的時間就需要1個月左右；⑵操作麻煩、不安全且容易造成錯誤的檢驗結果。由于需要配制多個試驗容器，配制過程很麻煩且不安全，對操作人員形成安全隱患，對環(huán)境也形成污染隱患；在配制多個試驗容器過程中比較容易被其他細菌污染，這樣就可能造成錯誤的檢驗結果。

此外，還有利用儀器鑒定藥物敏感性的方法，例如BACTEC?—TB460系統(tǒng)及BACTEC?960系統(tǒng)，其優(yōu)點是操作簡單，試驗過程時間短，平均檢出時間為14.4天,最快10天左右。但其存在的主要缺點是儀器設備的價位高，投資大；使用成本高，一是儀器設備的使用成本高，二是需要多個對比試驗標本，試劑的成本較高，其費用較大，一般醫(yī)院難以承受，難以推廣普及。

從上面詳細分析現有的結核分枝桿菌藥敏試驗方法可以看出，現有的紙片檢驗法和濃度檢驗法存在以下缺點：（1）整個檢驗過程所需的時間長。（2）操作麻煩。（3）不安全。（4）容易出現誤檢。而利用儀器鑒定藥物敏感性的方法投資大，使用成本高，難以推廣普及。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種能縮短結核分支枝桿菌藥敏試驗過程所需時間的結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法。