[發(fā)明專利]一種H9N2亞型禽流感病毒的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410306875.4
• 申請日: 2014-06-30
• 公開（公告）號: CN104073470A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設計）人: 李澤君;滕巧泱
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 上海世貿(mào)專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

技術(shù)領域：

本發(fā)明屬于生物工程領域，尤其涉及一種細胞的培養(yǎng)方法，具體來說是一種H9N2亞型禽流感病毒的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

禽流感(Avian?Influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(Avian?Influenza?Virus，AIV)引起的禽類高度接觸性傳染病，有16個HA亞型和9個NA亞型。根據(jù)禽流感病毒致病性的不同，可分為高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒。目前，我國的低致病性禽流感疫情主要以H9亞型為主。我國自1994年首次報道雞群分離到H9N2亞型AIV以來，該亞型禽流感病毒廣泛存在于我國遼寧、安徽、山東、廣東、福建、江蘇、河南、湖南、湖北、上海、廣西、云南、四川、新疆等大部分地區(qū)。H9N2亞型禽流感病毒雖然不引起感染的禽類大量死亡，但是由于該病毒傳播能力極強，存在范圍極廣，導致產(chǎn)蛋下降、免疫抑制病、與其它病原共感染時常導致高死亡率，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。進一步研究發(fā)現(xiàn)，H9N2亞型AIV能在不同宿主雞、鴨、鵪鶉、鴿子間交互傳播，進一步促進了該病毒的流行。同時，H9N2亞型AIV還可以感染豬、人(根據(jù)CDC公布的數(shù)據(jù)，1999年，2003年，2007年皆在香港發(fā)生感染事件)等。因此，H9N2亞型禽流感病毒在經(jīng)濟發(fā)展和公共衛(wèi)生安全上呈現(xiàn)出越來越重要的地位，也越來越引起人們的廣泛關注。

接種疫苗是預防禽流感發(fā)生與傳播最有效的手段，對提高我國的禽病防治水平，對保障我國養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展有十分積極的意義。目前，中國國內(nèi)的H9N2亞型禽流感疫苗均為雞胚尿囊液滅活疫苗，這些H9N2禽流感病毒滅活苗疫苗毒株皆為2002年前分離獲得的。研究發(fā)現(xiàn)，1998年-2006年間的毒株抗原性無變化，疫苗的保護率為100％。但2006年后，在疫苗的選擇壓力下，H9N2亞型的禽流感病毒毒株間抗原性發(fā)生了很大變化，疫苗的保護率在不斷地下降。上海市動物疫病預防控制中心的一份2009年監(jiān)測報告顯示，在上海三大活禽批發(fā)市場中的樣品H9亞型AIV平均陽性率為8.14％。其中在免疫了H9N2亞型AIV滅活苗且抗體合格率均大于70％的樣品中分離到45株H9亞型AIV病毒(45/195),在免疫H9N2亞型AIV滅活苗的抗體合格率達到100％的樣品中分離到了8株H9亞型AIV(8/90)。這些結(jié)果表明，現(xiàn)有的商品化H9亞型滅活疫苗免疫后，雞只機體產(chǎn)生較高的免疫抗體，但尚不能完全阻止病毒復制，進行有效地保護。因而，市場需要用現(xiàn)行的H9N2亞型禽流感病毒流行株制備的商品疫苗。

目前，雞胚是禽流感病毒疫苗生產(chǎn)和研究的主要材料，PR8病毒是一株雞胚適應病毒株，目前也是雞胚高產(chǎn)株之一，禽流感疫苗研制中常常將PR8的6個內(nèi)部基因與流行毒株的HA和NA基因重組(6+2)，并將重組病毒作為疫苗株來提高病毒滴度。然而雞胚培養(yǎng)流感病毒疫苗具有嚴重的缺陷，在疫情發(fā)生時，無法提供足夠的雞胚，因而無法在短期內(nèi)擴大疫苗產(chǎn)品。病毒擴增會受到雞胚中母源抗體的影響，使病毒滴度不能達到疫苗生產(chǎn)的需要；雞胚培養(yǎng)病毒產(chǎn)生大量的廢物，這些廢物的處理不僅需要消耗大量的能源，而且也容易造成環(huán)境污染。細胞培養(yǎng)的流感病毒，可克服這些缺點，因而成為目前流感疫苗研制工作的主要方向之一。流感病毒滅活苗毒種的擴增慢慢地已由雞胚向細胞轉(zhuǎn)化，且越來越顯示出經(jīng)濟效益及社會效益。人流感病毒在細胞疫苗的研究已取得重要突破，Baxter和Novartis等世界疫苗大公司，已用微載體細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)研發(fā)成功人用流感疫苗，并通過歐盟批準上市，產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益。在動物流感病毒方面，由于細胞對流感病毒的敏感度不及雞胚，因而細胞所制備的禽流感病毒滴度不夠理想，進一步加劇了禽用疫苗的經(jīng)濟制約，到目前為止尚未有禽流感病毒的細胞疫苗產(chǎn)品上市。