[發明專利]化學發光增敏液及其制備方法

有效

• 申請號: 201410302775.4
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104049080A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 金茂俊;王靜;楊麗華;杜鵬飛;金芬;邵華;佘永新;王珊珊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

技術領域

本發明涉及化學發光免疫分析技術領域，具體而言，特別涉及一種化學發光增敏液及其制備方法。

背景技術

化學發光是在常溫下，由化學反應產生的光的發射。其發光機理是：反應體系中的某些物質分子，如反應物、中間體或者熒光物質吸收了反應釋放的能量而由基態躍遷到激發態，當中間體由激發態回到基態時會釋放等能級的光子，對光子進行測定而實現定量分析。1977年，Halman等人通過將高特異性的抗原抗體反應與高靈敏度的化學發光反應結合起來，創建了化學發光免疫分析方法(Chemiluminescence?Immunoassay，CLIA)。

化學發光免疫分析方法是將化學發光與免疫反應相結合的產物，因化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，從而避免了熒光分析中激發光雜散光的影響。魯米諾是化學發光免疫分析中應用廣泛的標記物質，在堿性溶液中，魯米諾可被許多氧化劑氧化發光，其中H₂O₂最為常用。在化學發光免疫分析的過程中，因發光反應速度較慢，因此，常需添加某些酶類或無機催化劑。酶類主要是辣根過氧化物酶(HRP)，無機類包括O₃、鹵素及Fe³⁺、Cu²⁺、Co²⁺或它們的配合物。

化學發光酶免疫分析(Chemiluminescent?enzyme?immunoassay，CLELA)是以酶標記生物活性物質進行免疫反應，反應的過程中，酶作用于發光底物(如魯米諾)，在信號試劑作用下發光，再利用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，兩者有各自的發光底物。

相關技術中，辣根過氧化物酶(HRP)最常用發光底物是魯米諾。在化學發光酶免疫分析(CLEIA)中，使用辣根過氧化物酶標記抗體，進行免疫反應后，利用魯米諾作為發光底物，在辣根過氧化物酶(HRP)和起動發光試劑(NaOH和H₂O₂)作用下，發光底物(魯米諾)發光。在反應的過程中，該化學發光反應體系(HRP-H₂O₂-luminol)通常為幾秒內瞬時閃光，存在發光強度低、持續時間短的缺陷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種化學發光增敏液，以克服現有技術中的化學發光反應體系(HRP-H₂O₂-luminol)由于存在的發光強度低、持續時間短的技術問題。本發明的另一個目的在于提供一種上述化學發光增敏液的制備方法。

本發明實施例提供的這種化學發光增敏液，包括：0.1-100mmol/L的4-咪唑苯酚、0.05-100mmol/L的過氧化氫、0.05-100mmol/L魯米諾或魯米諾衍生物、0.01-10mol/L的堿、體積百分數為0.01％-20％有機溶劑、離子強度為0.01-10mol/L、pH值為7-11的緩沖液。

本發明提供的這種化學增敏液，其由4-咪唑苯酚、過氧化氫，魯米諾或魯米諾衍生物、堿、有機溶劑及緩沖液組成。在化學發光酶免疫分析(CLEIA)中，將該增敏液加入到含有辣根過氧化物酶(HRP)的化學發光體系中后，該增敏液以4-咪唑苯酚為增強劑，其優先與辣根過氧化物酶作用形成自由基，并且作為電子轉移中間體提高了魯米諾或魯米諾衍生物自由基的產率，進而實現增敏化學發光反應的效果，通過實驗發現，該增敏液可以顯著的增強反應體系的發光強度、大大的延長其發光持續時間，其最大發光強度(化學發光值)可以達到7.5×10⁷，發光持續時間可以達到25分鐘。因此，可廣泛用于以化學發光為檢測手段的化學、生物、免疫等檢測分析產品中，在檢測的過程中，由于發光增強效果顯著，其發光持續時間長，從而便于重復測量，進而可提高檢測分析的靈敏度和準確性。

可選的，所述化學發光增敏液包括：0.1-50mmol/L的4-咪唑苯酚、0.05-50mmol/L的過氧化氫、0.05-50mmol/L魯米諾或魯米諾衍生物、0.01-5mol/L的堿、體積百分數為0.01％-10％有機溶劑、離子強度為0.01-5mol/L的緩沖液。

可選的，所述魯米諾衍生物為魯米諾鈉鹽、異魯米諾或7-氨基-6-巰基鄰苯二甲酰肼。

可選的，所述堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣。

可選的，所述有機溶劑為二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇或乙腈；和/或；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液。