[發(fā)明專利]一株產(chǎn)阿魏酸酯酶的泡盛曲霉及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410299807.X
• 申請(qǐng)日: 2014-06-26
• 公開（公告）號(hào): CN104087513A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳暉;胡博涵;賴富饒;劉素純;曾嵐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12N9/18;C12Q1/44;C12R1/665
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株產(chǎn)阿魏酸酯酶的菌株及其應(yīng)用，具體涉及一株產(chǎn)阿魏酸酯酶的泡盛曲霉及其應(yīng)用。

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背景技術(shù)

小麥?zhǔn)鞘澜缟戏N植面積最為廣泛的作物之一，約占糧食作物種植面積的26%，我國(guó)小麥年產(chǎn)量高，小麥麩皮的年產(chǎn)量可達(dá)2000萬(wàn)噸以上，但是一直以來(lái)對(duì)于麩皮的開發(fā)利用較少，基本上僅以作為飼料原料而加以利用。小麥麩皮中主要含有非淀粉多糖、淀粉、脂肪、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)、維生素和酚類物質(zhì)等多種成分，其中以阿拉伯木聚糖為主的非淀粉多糖含46%，是小麥細(xì)胞壁的主要成分。麩皮中還含有一定數(shù)量的酚酸類物質(zhì)，如阿魏酸（ferulic?acid）、P-香豆酸(p-coumaricacid)、咖啡酸(caffeicacid)、芥子酸(sinapicacid)和丁香酸(syringicacid)等成分，其中以阿魏酸為主要成分，約為麩皮質(zhì)量的0.4%-0.7%。阿魏酸主要通過(guò)酯鍵與細(xì)胞壁多糖和木質(zhì)素項(xiàng)鏈，一般可以使用強(qiáng)堿將酯鍵斷開而釋放出來(lái)。

酚酸組要存在于麥麩皮層中，其具有較強(qiáng)的抗氧化活性和抗腫瘤作用，并對(duì)環(huán)境中的有毒物質(zhì)如多環(huán)芳烴和亞硝酸胺以及真菌毒素有抗誘變作用。有研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，在麥麩膳食纖維的離體發(fā)酵試驗(yàn)中，結(jié)腸微生物能通過(guò)發(fā)酵作用將結(jié)合在麥麩膳食纖維上的阿魏酸釋放出來(lái)。而阿魏酸可顯著降低人子宮頸癌細(xì)胞的生存能力、存活和抗氧化水平，同時(shí)提高癌細(xì)胞保內(nèi)的活性氧水平并增加癌細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化及DNA損傷作用。另有報(bào)道認(rèn)為阿魏酸可通過(guò)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)、血小板源生長(zhǎng)因子（PDGF）和缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）的作用來(lái)調(diào)節(jié)血管的形成。

目前，研究表明酚類物質(zhì)主要以游離型、結(jié)合型和束縛型等幾種形式存在于植物機(jī)體內(nèi)，一般來(lái)說(shuō)，游離性和結(jié)合型酚類物質(zhì)為可溶性酚類；束縛型則為不溶性酚類物質(zhì)，以酯鍵、糖苷鍵和醚苷鍵形式與其他物質(zhì)（包括蛋白質(zhì)、糖類、有機(jī)酸等）相結(jié)合。

對(duì)于酚類物質(zhì)的提取，一般采用有機(jī)溶劑為媒介，輔以超聲、微波、亞臨界等方法進(jìn)行。由于束縛型酚類物質(zhì)一般與其他物質(zhì)以不同的鍵型相連結(jié)，傳統(tǒng)的提取方法不足以將酯鍵、糖苷鍵或醚鍵斷裂，因此對(duì)束縛型酚類物質(zhì)的提取主要采用強(qiáng)酸強(qiáng)堿或生物方法（酶法和發(fā)酵法），其主要目的都是破壞細(xì)胞壁纖維成分致密的結(jié)構(gòu)，以使束縛行酚類物質(zhì)釋放出來(lái)。

盡管化學(xué)方法操作簡(jiǎn)單、效率高，但是后續(xù)需要處理提取廢液，不利于可持續(xù)性發(fā)展。因此相比較而言，采用生物方法更符合綠色、環(huán)保的發(fā)展要求。對(duì)于麥麩進(jìn)行發(fā)酵方面的多集中在低聚木糖生產(chǎn)和產(chǎn)酶活性等領(lǐng)域，另外已有大量文獻(xiàn)報(bào)道麥麩經(jīng)發(fā)酵后等到膳食纖維功能性質(zhì)比發(fā)酵前有大幅改善，如持水性、持油性和對(duì)有害物質(zhì)的結(jié)合能力等。

阿魏酸作為麥麩中的主要酚酸，目前對(duì)其獲得的方式主要為酶法，以發(fā)酵方式的報(bào)道較少，特別需要指出的是，麥麩中的阿魏酸基本適宜束縛型的形態(tài)存在的，其游離型：結(jié)合型：束縛型的比例為0.1:1:100。近年來(lái)，對(duì)酚類物質(zhì)存在形式的研究逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。目前已對(duì)一些游離型、酯化型、糖苷型、束縛型酚類物質(zhì)的提取、測(cè)定及抗氧化活性等方面的報(bào)道。酚類物質(zhì)的存在形與其含量及抗氧化活性有重要關(guān)系，束縛型酚類物質(zhì)不僅含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于游離型和結(jié)合型，且抗氧化性活性和抑制DNA損傷方面要高于其他兩種類型。

本發(fā)明旨在利用微生物資源采用發(fā)酵工程技術(shù)將農(nóng)業(yè)資源轉(zhuǎn)化形成人類社會(huì)需求的物質(zhì)，解決抗氧化物質(zhì)資源短缺的問(wèn)題。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是：針對(duì)現(xiàn)有抗氧化供應(yīng)的提供新的原料和方法，并對(duì)小麥等大宗植物進(jìn)行再利用，提供一株產(chǎn)阿魏酸酯酶的泡盛曲霉及其應(yīng)用，其可利用小麥麩皮發(fā)酵生產(chǎn)阿魏酸，由于微生物生長(zhǎng)周期短、不受氣候限制，易于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，從而解決阿魏酸不足等問(wèn)題。

本發(fā)明提供一株產(chǎn)阿魏酸酯酶的泡盛曲霉，來(lái)源于腐爛的橘子表皮，經(jīng)過(guò)篩選，分離純化得到的。所述泡盛曲霉的分類命名為泡盛曲霉（Aspergillus?awamori）黑桔抑菌，由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，簡(jiǎn)稱CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2013639，其ITS序列表如序列表1所示，保藏日期為2013年12月8日，保藏地址為中國(guó)?武漢?武漢大學(xué)，中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。