[發明專利]一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法

在審

• 申請號: 201410299787.6
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104073530A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 龔國利;馬利云
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C07D493/04;C12R1/01
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

1.一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將纖維堆囊菌經種子活化培養后，接入到裝有發酵培養基的發酵罐中在28～32℃下進行發酵；其中，纖維堆囊菌的接種量為發酵培養基體積的6％～12％；

2)發酵罐中纖維堆囊菌發酵48～60h時，將發酵液連續通過吸附柱，經吸附柱后的發酵液返回發酵罐中繼續發酵；發酵48～60h后向發酵罐中補充用于維持埃博霉B合成的葡萄糖；其中，吸附柱內填有能夠吸附埃博霉素B的大孔吸附樹脂；

3)當發酵罐中纖維堆囊菌的濃度達到最大時，繼續發酵12～36h后終止發酵，取出吸附柱內的大孔吸附樹脂，經萃取、提純得到埃博霉素B。

2.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述裝有發酵培養基的發酵罐中的發酵培養基的體積占發酵罐體積的50％～70％。

3.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的發酵培養基的pH為7.2～7.6，并且經過滅菌，發酵培養基的組分為：酵母粉20～50g/L、玉米淀粉5～10g/L、磷酸二氫鈉1～2g/L、磷酸氫二鈉1～2g/L、MgSO₄·7H₂O2～5g/L、FeSO₄·7H₂O0.1～0.5g/L、CaCl₂2～5g/L、MnCl₂0.1～0.5g/L和葡萄糖10～15g/L。

4.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的纖維堆囊菌為ATCC25532或ATCC25569；當發酵罐中纖維堆囊菌的濃度達到最大時，發酵的時間為5～7d。

5.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為經過預處理的樹脂，預處理的具體過程為：將大孔吸附樹脂浸在體積分數為30～60％的甲醇水溶液中12～24h。

6.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂的體積占吸附柱的容積的10％～20％。

7.根據權利要求5或6所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為平均孔徑為的非極性大孔樹脂。

8.根據權利要求7所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的非極性大孔樹脂為XAD-16大孔吸附樹脂。

9.根據權利要求1所述的一種連續吸附耦合發酵生產埃博霉素B的方法，其特征在于，所述的吸附柱的材質為金屬、陶瓷或玻璃。