[發明專利]一種去除多肽中的內毒素的方法

在審

• 申請號: 201410299464.7
• 申請日: 2014-06-26
• 公開（公告）號: CN104031900A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 黃臻輝;周建華;周偉潔;琚姝;王克平;孫源遠
• 申請（專利權）人: 上海第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C07K14/59;C07K14/695;C07K14/575;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;王衛彬

1.一種去多肽中的內毒素的方法，其包括下述步驟：將多肽粗品溶解于水中，超濾濃縮得到濃縮液，依次加入磷酸鹽水溶液和鈣鹽水溶液，調節pH值為8～9，離心，即可；所述的多肽粗品為玻璃酸酶粗品、絨促性素粗品、尿促性素粗品或促皮質素粗品。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的絨促性素粗品進行下述前處理：加入醋酸鈉緩沖液溶解，離心，上清液依次加入聚乙二醇辛基苯基醚、磷酸三丁酯，攪拌，上述溶液通過Spff柱層析進行純化，洗脫液過濾后加入乙醇，靜置，離心，即可；

所述的促皮質素粗品進行下述前處理：加入丙酮和鹽酸，離心，即可。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的超濾濃縮采用的超濾膜為德國賽多利斯公司的Hydrosart超濾膜，截留相對分子質量是5kDa或10kDa；

和/或，所述的超濾濃縮得到的濃縮液的體積為超濾濃縮前體積的0.1～0.3倍。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽為磷酸鈉和/或磷酸鉀；

和/或，所述的鈣鹽為醋酸鈣和/或氯化鈣。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽水溶液與所述的濃縮液的體積比為(0.1～0.2)：1；

和/或，所述的鈣鹽水溶液與所述的磷酸鹽水溶液的體積比為(0.5～0.7)：1。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽水溶液的濃度為0.2～0.5mol/L；

和/或，所述的鈣鹽水溶液的濃度為0.8～1.5mol/L。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽與所述的鈣鹽的摩爾比為1：(0.5～2)。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽與所述的鈣鹽的摩爾比為1：1.5。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的離心的轉速為3000～4000rpm。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的離心為冷凍離心10～30min；所述的冷凍離心的溫度較佳地為4～10℃。