[發明專利]一種基于酶聯免疫分析的HPV核酸檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201410298037.7
• 申請日: 2014-06-26
• 公開（公告）號: CN104020291A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 沈萍萍;丁森;盧彥
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/535
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

1.一種基于酶聯免疫分析的HPV16型E6、E7RNA檢測試劑盒，其特征是試劑盒的組成部分為：

(1)預包被的酶標板：PLL處理的聚苯乙烯微孔板，BSA封閉，儲藏條件為4℃，保質期半年；

(2)探針混合液1：針對HPV16E6RNA片段的探針組合，E6DNA1、E6DNA2、E6DNA3，濃度均為10uM；

(3)探針混合液2：針對HPV16E7RNA片段的探針組合，E7DNA1、E7DNA2，濃度均為10uM；

(4)10×退火緩沖液：Tris-HCl100mM，pH7.5，EDTA10mM，NaCl1M；

(5)針對DNA-RNA的鼠源單克隆抗體Sdr溶液；

(6)針對Sdr的酶標二抗溶液；

(7)底物顯色溶液：TMB溶液；

(8)洗滌緩沖液：10×PBS溶液；

(9)反應終止液：2M?H₂SO₄。

2.根據權利要求1所述試劑盒用于體外轉錄RNA模板或直接從病樣中提取的RNA的檢測方法，其特征是由以下步驟構成：

(1)將體外轉錄RNA模板或直接從病樣中提取的RNA與探針混合液1或2進行雜交，雜交體系：10uL10×退火緩沖液，3uL或2uL探針混合液，RNA模板溶液10uL，補充DEPC?H₂O至100uL；雜交條件：95℃5min，65℃2h，冰上冷卻5min；

(2)預包被的酶標板中，每孔加入100uL雜交產物，室溫孵育1h，300uL?PBST洗5次；每孔加入100uL?Sdr單克隆抗體溶液，室溫孵育1h，如上洗滌；每孔加入100uL酶標二抗溶液，室溫孵育1h，如上洗滌；加入100uL?TMB底物顯色溶液，37℃孵育20min；每孔加入50uL反應終止液終止反應，測Abs值，測量波長450nm，參比波長570nm。

3.根據權利要求1所述試劑盒在高危HPV16型人乳頭瘤病毒檢測中的應用。