[發明專利]一種從虎杖中酶解提取白藜蘆醇的方法

在審

• 申請號: 201410294638.0
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104087623A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 譚世語;周炳賢;周小華;蔡衛超;江春立;丁文彪;卿萬梅
• 申請（專利權）人: 湖南鑫利生物科技有限公司;重慶大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域

本發明屬于從天然植物中提取白藜蘆醇的技術領域，具體涉及從天然植物的虎杖中制備白藜蘆醇的方法。

二、背景技術

白藜蘆醇是一種含有芪類結構的非黃酮類多酚化合物，化學名為3，4'，5-三羥基二苯乙烯，白色或淡黃色結晶粉末。白藜蘆醇既能預防腫瘤癌癥疾病，又能預防心腦血管疾病，具有保肝、抗氧化、調節血脂平衡、延緩衰老等保健作用，是對人類健康有顯著積極功效的活性物質，因此其在醫藥保健方面應用非常廣泛。由于白藜蘆醇是芪類物質的多酚類化合物，具有酚類和烯類性質，在與空氣曝露或者光照條件下，白藜蘆醇會被氧化或發生異構轉變生成不可逆物質，生理活性遭破壞損失，因此為了提高白藜蘆醇收率和延長存放時間，白藜蘆醇的生產和保存過程要求比較嚴格。白藜蘆醇普遍存在于虎杖、花生、桑葚、葡萄科等天然植物體內并且主要是以相對穩定的白藜蘆醇苷分子形式存在。特別是虎杖中的白藜蘆醇苷和白藜蘆醇總含量比其他天然植物高，工業化生產潛在效益巨大。因此，從虎杖中提取白藜蘆醇是當今研究的重點。

現有從虎杖中提取白藜蘆醇的方法，如2013年4月17日公布的公布號為CN103044210A的“一種從虎杖中制備白藜蘆醇的生產工藝”專利，公開的方法是：以虎杖為原料，經酶解晾干、連續逆流提取罐丙酮回流提取、過濾濃縮、乙酸乙酯萃取、濃縮、硅膠層析，濃縮結晶制得白藜蘆醇晶體成品。該方法的主要缺點是：①恒溫酶解反應時間較長，長時間高溫不利于白藜蘆醇的化學結構穩定性；②由于白藜蘆醇在暴露光照條件下易失活而使含量降低，因此酶解后晾曬操作也不利于白藜蘆醇的化學結構穩定性；③由于丙酮沸點較低，易揮發，具有一定毒性，與空氣混合易發生爆炸危險，因此，其作為逆流提取溶劑時，相應設備的保溫和密封相對要求較高；④采用乙酸乙酯-石油醚作為分離洗脫溶劑，其中石油醚毒性較大而且易燃，溶劑回收過程涉及較大安全隱患。

三、發明內容

本發明的目的是針對現有從虎杖中提取白藜蘆醇方法的不足，提供一種從虎杖中酶解提取白藜蘆醇的方法，具有酶解充分且時間短，生產設備簡單，操作成本低，運行安全性高，綠色環保，易于推廣工業化生產等特點。

本發明的主要原理是：虎杖中白藜蘆醇主要以白藜蘆醇苷形式的存在，其分子式為C₂₀H₂₂O₈，化學名為3，4′，5-三羥基二苯乙烯-3-β-D-葡萄糖苷，它在熱水溶中具有良好的溶解度，易溶于甲醇、乙醇等有機溶劑。在合適pH值一定溫度且攪拌條件下，白藜蘆醇苷逐步從虎杖中溶出，同時溶液中的酶作用于白藜蘆醇苷的β-D糖苷鍵，使其水解生成白藜蘆醇(C₁₄H₁₂O₃)和葡萄糖。另外，酶也可破壞虎杖植物細胞壁，有利于白藜蘆醇苷的溶出和轉化。

實現本發明目的的技術方案是：一種從虎杖中酶解提取白藜蘆醇的方法，以市售的虎杖根莖為原料，經酶解反應、醇深度提取和分離濃縮、干燥的簡單工藝而制得白藜蘆醇晶體粉末產品。所述方法的具體步驟如下：

(1)酶解反應

先將市售的虎杖根莖原料放置于粉碎機中進行粉碎，再經240～320目的篩進行分篩，收集過篩的粉末，備用，未過篩的顆粒再返回粉碎機中進行粉碎。然后，按虎杖粉末的質量(g)∶纖維素酶的質量(mg)∶醋酸-醋酸鈉緩沖溶液的體積(mL)之比為1∶(1～10)∶(10～50)的比例，先用高濃度鹽酸或氫氧化鈉溶液調節所述緩沖溶液的pH值為4～6后，將虎杖粉末和調節pH值后的緩沖溶液，依次放置于間歇反應器中，在30～60℃恒溫和80～200r/min的轉速下，攪拌15～30min后，再加入纖維素酶，繼續恒溫攪拌，進行酶解反應15～30h，就制得酶解反應后的固液混合物。

(2)醇深度提取