[發明專利]一種長牡蠣類干擾素（CgIFN?like）基因重組蛋白及其制備和應用

有效

• 申請號: 201410294514.2
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104086643B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 宋林生;張冉;王玲玲;張峘;劉瑞
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/555
• 分類號: C07K14/555;C12N15/20;C12N15/70;A61K38/21;A61P35/00;A61P37/04;A23K20/147
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 周秀梅,李穎

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體的說是一種長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白及其制備和應用。

背景技術

干擾素(IFN)是機體細胞在病毒感染，或者受核酸、細菌內毒素、促細胞分裂素等的作用下，由受體細胞分泌的一種具有高度生物學活性的糖蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調節等生物學功能。干擾素系統是先天性免疫系統抵抗病毒感染的主要構成者，包括分泌合成干擾素的細胞系統以及接受干擾素作用的細胞系統，即指所有經病毒感染等外部刺激后能激活干擾素合成的細胞以及對干擾素的作用發生反應并建立抗病毒狀態的細胞，是機體對抗病毒感染的一道重要防御系統，它與細胞免疫、體液免疫及其他非特異性免疫協同作用抵抗病毒的侵染。干擾素自發現以來引起了人們極大的興趣，一直是病毒學、細胞學、免疫學、分子生物學、臨床醫學、腫瘤學等相關學科的研究熱點。但由于來源限制，無法得到廣泛應用，直到1986年，基因工程干擾素的出現，才使得干擾素能夠大量應用于臨床，干擾素的產生可以激活細胞的免疫防御系統從而清除病原體或者腫瘤。

牡蠣是一種含有較高活性物質的海洋經濟貝類，含有豐富的氨基酸、多糖、蛋白質、牛磺酸、微量元素等生物活性物質，具有很高的藥用價值，而且作為低等無脊椎動物的代表，特殊的進化地位，值得人們對其進行研究開發。

目前，干擾素系統在哺乳動物及魚類中已經得到了較深入的研究，但是在軟體動物中干擾素系統研究較少，因此對長牡蠣干擾素的研究有利于軟體動物中干擾素的開發和利用。

發明內容

本發明的在于提供一種長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白及其制備和應用。為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白，CgIFN-like基因重組蛋白為序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。

所述的長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白的制備方法

(1)以長牡蠣CgIFN-like編碼區為模板，采用P1和P2引物進行PCR擴增，待用；

(2)PCR擴增產物與將pET-30a(+)載體通過T4連接酶連接，轉化，測序鑒定重組子；

(3)將上述構建重組子轉入大腸桿菌Transetta(DE3)表達菌株中進行 誘導培養，然后利用親和層析化蛋白，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重組蛋白rCgIFN-like；

所述引物P1和P2分別為：

P1：5’-CGGGATCCATGGAGAGGAAAAAGGAT-3’

P2：5’-CCCAAGCTTCTAAGTCATTAATTTTCTTTC-3’。

所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列編碼CgIFN-like體外重組的蛋白可用于制備免疫增強劑。

所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列編碼CgIFN-like體外重組的蛋白可用于制備抗癌的藥物。本發明所具有的優點：

本發明利用體外重組表達技術獲得了長牡蠣類干擾素蛋白，該重組蛋白可以激活長牡蠣的細胞免疫系統引起細胞凋亡，同時也可以促進血細胞對燦爛弧菌的吞噬能力，并能抑制人肺癌細胞A549的增殖，作為一種有效的細胞免疫調節劑和增強劑，在開發廣譜抗菌類藥物、新型免疫制劑和飼料添加劑以及新型的海洋抗腫瘤天然活性產物等方面具有潛在應用價值。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白促進細胞凋亡的作用圖。

圖2為本發明實施例提供的長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白增強血細胞對燦爛弧菌的吞噬功能圖。

圖3為本發明實施例提供的長牡蠣類干擾素(CgIFN-like)基因重組蛋白抑制小鼠成纖維細胞L929(a)和人肺癌細胞A549(b)的增殖作用圖。

其中，圖3a中，rCgIFN：牡蠣重組蛋白；HIFN：商品化人重組干擾素蛋白；L929：小鼠成纖維細胞，在rCgIFN和HIFN處理12，24，48，72h后，L929細胞的活力；

圖3b中rCgIFN：牡蠣重組蛋白；HIFN：商品化人重組干擾素蛋；A549：人肺癌細胞，在rCgIFN和HIFN處理12，24，36，48，72h后，A549細胞的活力。

具體實施方式

下面的實驗例中將對本發明作進一步的闡述，但本發明不限于此。