[發明專利]快速檢測HLA-B*1502等位基因的引物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201410293464.6
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104046696A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 鄭仲征;潘捷;謝志聰
• 申請（專利權）人: 上海荻碩貝肯生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京萬慧達知識產權代理有限公司 11111
• 代理人: 楊穎;張金芝

1.一種快速檢測HLA-B*1502基因的引物，其包含SEQ?ID?NO.1-4所示的檢測引物EPF01、EPR01、EPF02和EPR02，所述四種引物分別組成引物組P1和P2，其中P1組為EPF01-EPR01-EPF02-EPR02，P2組為EPF01-EPR02-EPF02-EPR01。

2.根據權利要求1所述的引物，其進一步包含SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的內對照引物NCXF和NCXR。

3.一種快速檢測HLA-B*1502基因的試劑盒，其包含PCR反應混合液和Taq酶，所述PCR反應混合液分別包含權利要求1所述的引物組P1和P2，所述Taq酶的濃度優選為5U/μL。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其中快速檢測HLA-B*1502基因的引物EPF01、EPR01、EPF02和EPR02的濃度均為0.5μM。

5.根據權利要求3或4所述的試劑盒，其中PCR反應混合液中進一步包含權利要求2所述的內對照引物。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中內對照引物NCXF和NCXR的濃度均為0.2μM。

7.根據權利要求3至6任一項所述的試劑盒，其中PCR反應混合液中進一步包含dNTPs，染料和PCR緩沖液，染料優選為甲酚紅。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其中dNTPs濃度為0.2mM，染料濃度為0.01％，PCR緩沖液組成為：Tris-HCL濃度10mM，氯化鉀濃度50mM，氯化鎂濃度1.5mM，明膠濃度0.001％。

9.一種快速檢測HLA-B*1502基因的方法，其包含以下步驟：

(1)提取待檢測樣品的DNA溶液，

(2)采用權利要求1或2所述的引物，或采用權利要求3至8中任一項所述的試劑盒，以步驟(1)中提取的DNA溶液作為模板，進行PCR擴增；

(3)PCR擴增產物經電泳后，進行結果判讀，當內對照條帶和HLA-B*1502基因條帶同時出現時，表明該基因為HLA-B*1502基因陽性，而只出現內對照條帶時，則表明該基因為HLA-B*1502基因陰性。

10.權利要求1或2所述的引物，或者權利要求3至8中任一項所述的試劑盒在快速檢測HLA-B*1502基因中的應用。