[發(fā)明專利]從天花粉中綜合提取多種生物活性成分的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410291925.6 | 申請日： | 2014-06-26 |
| 公開（公告）號： | CN104045729A | 公開（公告）日： | 2014-09-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳穎;孫涌棟;劉明久;李勇超 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南科技學院 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00;C08B30/00;C07K14/415;C07K14/42;C07K1/30 |
| 代理公司： | 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111 | 代理人： | 陳勇 |
| 地址： | 453003*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 天花粉 綜合 提取 多種 生物 活性 成分 方法 | ||
1.一種從天花粉中綜合提取多種生物活性成分的方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步驟：
a、醇溶物的提取：
首先在天花粉中加入5～10倍天花粉重量的乙醇，然后在20～25℃條件下超聲波震蕩5～10分鐘，超聲波處理后加熱至80～90℃回流提取2～4小時，移出提取液；將移出的提取液進行抽濾，所得濾渣按照上面同樣方法再提取一次，提取后移出提取液，提取液移出后再次進行抽濾，所得濾渣用于步驟b進一步提取；合并兩次抽濾所得的濾液，將所得濾液進行減壓濃縮，回收乙醇；當濾液濃縮至膏狀后再次進行真空干燥，干燥至粉末狀，得到粉狀醇溶物；
b、天花粉水溶性多糖的提取：
將步驟a所得濾渣中加入濾渣質(zhì)量3～6倍的蒸餾水，加熱至50～70℃條件下攪拌提取2～3小時，移出提取液進行離心，離心后移出上清液；在移出上清液后所剩的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量3～6倍的蒸餾水，加熱至50～70℃條件下攪拌再次提取2～3小時，移出提取液，進行離心，離心后移出上清液；合并兩次離心后得到的上清液，兩次提取后所剩沉淀物用于步驟c進一步提取；將合并后上清液中加入無水乙醇至體積百分濃度為40～60%，靜置收集沉淀物用于步驟c進一步提取，所得上清液進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至原上清液體積的1/6～1/8，所得濃縮液中加入質(zhì)量百分濃度為20%的三氯乙酸，當三氯乙酸終濃度為8%時停止加入，然后攪拌30～60分鐘，攪拌后在4℃條件下靜置10～16小時，靜置后離心，離心后所得沉淀物用于步驟c進一步提取，所得上清液中加入無水乙醇至體積百分濃度為70～80%，靜置沉淀出的多糖用體積百分濃度為95%的乙醇進行洗滌，洗滌后進行真空干燥，干燥至粉末狀，得到粉狀天花粉水溶性粗多糖；
c、天花粉堿溶性多糖的提取：
收集步驟b得到的沉淀物，在收集的沉淀物中加入質(zhì)量濃度為4%的氫氧化鈉水溶液，所述沉淀物與氫氧化鈉溶液二者之間的質(zhì)量比為1：3～7，加熱至55～65℃條件下提取30～50分鐘，提取后移出提取液，進行離心，離心后移出上清液；移出上清液后的沉淀物按照同樣的方法進行第二次提取，提取后移出提取液、離心分離，移出第二次上清液，同時得到所剩的沉淀物，該沉淀物用于步驟d進一步提取；合并兩次所得上清液，在上清液中加入濃度為12mol/L濃鹽酸中和至pH?值為7.0，接著進行離心，移出上清液，得到沉淀堿溶性多糖，用水洗滌所得堿溶性多糖3～5次，洗滌后進行真空干燥，干燥至粉末狀，得到粉狀堿溶性粗多糖；
d、天花粉蛋白的提取：
在步驟c所剩沉淀物中加入pH值為10的氫氧化鈉水溶液，所述沉淀物與氫氧化鈉水溶液二者之間的比例為1g：5～10mL，在4～20℃條件下攪拌提取30～50分鐘，提取后移出提取液進行離心分離，離心分離后移出上清液，得到的沉淀物用于步驟e進一步提取；所得上清液減壓濃縮至原體積的1/5～1/6，所得濃縮液中加入5倍體積的無水乙醇，所述無水乙醇預先冷卻至4～10℃，無水乙醇邊加入邊攪拌，充分攪拌后于4℃條件下靜置18～22h；靜置后離心，離心后得到沉淀的蛋白；所得蛋白用體積百分濃度為95%乙醇洗滌2～3次，洗滌后真空干燥至粉末狀，得天花粉蛋白；
e、天花粉凝集素的提取：
在步驟d得到的沉淀物中加入pH值5.5的鹽酸水溶液，所述沉淀物與鹽酸水溶液二則之間加入量的比例為1g：5～10mL，然后在4～20℃下攪拌提取12～24小時，提取后移出提取液，移出提取液后所剩的沉淀物用于步驟f進一步提取；所得提取液中加入飽和硫酸銨溶液，所述提取液與飽和硫酸銨溶液之間的體積比1：0.1～2，靜置收集所得沉淀、透析過夜后真空干燥至粉末狀，干燥后得到天花粉凝集素；
f、天花粉淀粉的提取：
步驟e中所剩的沉淀物首先用蒸餾水洗滌3～5次，以除去沉淀物中殘留的鹽酸，然后在100～110℃烘干4～6小時，烘干后得到天花粉淀粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從天花粉中綜合提取多種生物活性成分的方法，其特征在于：步驟a中所述在天花粉中加入5～10倍天花粉重量的乙醇，其乙醇的體積百分濃度為80～95%；所述超聲波震蕩時功率為250W、頻率為50KHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從天花粉中綜合提取多種生物活性成分的方法，其特征在于：步驟a中所述將所得濾液進行減壓濃縮，減壓濃縮時真空度為0.07～0.09MPa、溫度為40～80℃；所述當濾液濃縮至膏狀后再次進行真空干燥，其真空度為0.01～0.07MPa、溫度為40～80℃。
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