[發(fā)明專利]一種胡蘆巴總皂苷提取物的質(zhì)量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410289093.4
• 申請(qǐng)日: 2014-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104062372A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧赟;李秀茹;劉海峰;姚晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都合盛生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;全學(xué)榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種胡蘆巴總皂苷提取物中總皂苷的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

胡蘆巴為豆科胡蘆豆屬植物胡蘆巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟種子，原產(chǎn)于地中海東岸、中東、伊朗高原及西馬拉雅地區(qū)，我國(guó)主要分布于四川、安徽、河南、新疆等地，且南北各地均有栽培。胡蘆巴在非洲、北美等國(guó)家作為調(diào)味品和開(kāi)胃品使用，民間也將其作為滋補(bǔ)品和營(yíng)養(yǎng)品使用；埃及人將胡蘆巴作為生活必需品^[1]。在中國(guó)胡蘆巴屬于藥食同源之品，始載于《嘉佑本草》。據(jù)《本草綱目》記載:胡蘆巴，右腎命門藥也，元陽(yáng)不足，冷氣潛伏，不能歸元者宜之。張子和《儒門事親》云，有人病目不睹，思食苦豆，即胡蘆巴，頻頻不缺，不周歲而目中微痛，如蟲(chóng)行入眥，漸明而愈。按此亦因其益命門之功，所謂益火之源，以消陰翳是也。《中國(guó)藥典》記載本品味苦，性溫，歸腎經(jīng)，具有溫腎助陽(yáng)，祛寒止痛之功效^[2]，常用于治療寒疝，腹脅脹滿，寒濕腳氣，腎虛腰酸，陽(yáng)痿。

胡蘆巴種子中含有多種化學(xué)成分，其中主要為甾體皂苷類、黃酮類、氨基酸類等成分。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)胡蘆巴具有降血糖、降血脂、抗糖尿病并發(fā)癥、抗腫瘤、抗血脂異常、抗氧化損害、解乙醇中毒、殺蟲(chóng)等生物活性^[3]。

研究發(fā)現(xiàn)皂苷類成分為胡蘆巴藥材的主要藥效成分。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)胡蘆巴總皂苷提取物具有防治糖尿病及糖尿病慢性并發(fā)癥、調(diào)節(jié)血糖血脂等作用^[4]。胡蘆巴總皂苷可通過(guò)下調(diào)組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(tTG)實(shí)現(xiàn)對(duì)大鼠心肌的保護(hù)作用^[5]；胡蘆巴總皂苷能夠降低大鼠酒精性脂肪肝的血清TNF-α水平，升高脂聯(lián)素(adiponectin)水平，從而促進(jìn)肝臟脂肪氧化，減少脂質(zhì)生成，實(shí)現(xiàn)對(duì)酒精性脂肪肝的治療作用^[6]；Sreemayee ChatterJee等^[7]研究發(fā)現(xiàn)胡蘆巴提取物在腫瘤發(fā)生的所有階段均有效，且其能影響小鼠肝臟抗氧化防御系統(tǒng)，調(diào)節(jié)谷胱甘肽和過(guò)氧化脂質(zhì)體水平；胡蘆巴總皂苷對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用^[8]；胡蘆巴皂苷還有調(diào)節(jié)食源性代謝紊亂作用^[9]。

胡蘆巴總皂苷作為胡蘆巴藥材的主要有效成分，市面上銷售較大，但存在著不法商販用廉價(jià)皂苷摻假銷售現(xiàn)象，而目前主要檢測(cè)胡蘆巴總皂苷的方法是紫外分光光度法，但是此方法誤差大、專屬性不好，易受環(huán)境、儀器等外部因素影響。因此，建立一種較為準(zhǔn)確檢測(cè)胡蘆巴總皂苷含量的方法是極其迫切的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種胡蘆巴總皂苷提取物的檢測(cè)方法。

本發(fā)明提供了一種胡蘆巴總皂苷提取物的檢測(cè)方法，它是以薯蕷皂苷元為總皂苷水解產(chǎn)物中的指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，其中，色譜條件為：

色譜條件：SSI series 1500高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器；色譜柱：TIANHE Kromasil C₁₈(200mm×4.6mm,5μm)，S/N:18201306；流動(dòng)相：甲醇(B)-水(A)[0-30min:90％B；30-35min:90％B-100％B；35-60min:100％B]；流速：0.8-1.0ml/min；柱溫：30-40℃；進(jìn)樣量：10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)為：203-210nm。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；所述的柱溫是35℃；所述的流速：1.0ml/min。

本發(fā)明檢測(cè)方法，其特征在于：它包括如下步驟：

a、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品適量，置容量瓶中，加入甲醇充分溶解后，定容至刻度，制備成濃度為1.080mg/ml的對(duì)照品溶液，備用；

b、供試品溶液的制備：取胡蘆巴總皂苷提取物，加入總皂苷提取物量10-90倍的5％-25％硫酸溶液，超聲處理使溶解，于100℃恒溫水浴中回流水解1-5小時(shí)，期間每隔1h取出一次，超聲處理使其分散，然后繼續(xù)水解，水解完畢后，立即冷卻終止反應(yīng)，過(guò)濾，沉淀用水洗至中性，即得水解產(chǎn)物；水解產(chǎn)物用甲醇溶解并定容，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

c、將供試品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定薯蕷皂苷元的含量。

其中，b步驟加入總皂苷提取物量30-40倍的15％硫酸溶液；所述的水解時(shí)間為4小時(shí)。