[發明專利]從樺褐孔菌中提取制備樺褐孔菌多糖的方法

有效

• 申請號: 201410287773.2
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104045724A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 杜秀菊;張揚;劉珊
• 申請（專利權）人: 聊城大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體是涉及一種從樺褐孔菌中提取制備樺褐孔菌多糖的方法。

背景技術

樺褐孔菌[Inonotus?obliquus?(Fr.)Pilat]是一著名的民間野生藥用真菌。研究表明，樺褐孔菌多糖是重要的活性成分之一，具有增強免疫調節、抗腫瘤、抗氧化、降血糖及抗病毒等多種藥理活性，已成為國內外研究的熱點領域之一。但目前對樺褐孔菌多糖的分離純化的研究報道相對較少。

由于多糖的組成復雜性，多糖粗提物的分子量分布較廣，多糖種類也很多，而且前期實驗表明，提取后的樺褐孔菌粗多糖中含有一定量的蛋白和色素，影響多糖的化學結構和生物活性研究，因此有必要對多糖進行分離純化。但去除粗多糖中的蛋白和色素，一直是多糖分離純化中的一大難題，傳統的去蛋白以Sevage法為主，方法操作繁瑣，效率低，采用的有機溶劑有毒性因而影響多糖的生物活性；活性炭法去除色素效果較好，但后期的活性炭粉末不易去除，過氧化氫法因為較強的抗氧化活性去除色素效果很好，但對多糖的活性影響較大，因此急需探索一種新的精制方法。

大孔吸附樹脂是一類不含交換基團的高分子吸附材料，具有良好的大孔網狀結構和較大的比表面積，具有很好的吸附活性，某些大孔樹脂已經用到植物多糖中的去蛋白研究中，取得了很好的效果。

申請公布CN102603906A（申請號?201110461635.8）的中國專利文獻公開了一種樺褐孔菌多糖水溶液的制備方法：一種樺褐孔菌多糖水溶液的制備方法，包括以下步驟：?三氯乙酸脫蛋白：向樺褐孔菌提取物中加入三氯乙酸，靜置，然后固液分離，取分離得到的固體物質；活性炭脫色：向步驟；?所得固體物質按體積加入50-100?倍的水，然后加入活性炭脫色，然后固液分離，取所得上清液；用天然澄清劑澄清：所得上清液加入天然澄清劑澄清。

大孔樹脂用以去除樺褐孔菌粗多糖尚未見有文獻報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種精制樺褐孔菌粗多糖的工藝，本發明的核心技術是：應用生物酶和大孔吸附樹脂替代傳統的Sevage法、活性炭法和過氧化氫法去除蛋白和色素，適合規模化產業化制備樺褐孔菌精制多糖。

本發明的技術方案如下：

從樺褐孔菌中提取制備樺褐孔菌多糖的方法，其包括如下步驟：A．原料的脫脂預處理；B．熱水浸提制備粗多糖；C．粗多糖酶解；D．大孔吸附樹脂DM301處理；E．超濾去除小分子；F.真空冷凍干燥；制備樺褐孔菌多糖。

前面所述的方法，優選的方案是，步驟A．原料的脫脂預處理是指，取干燥的樺褐孔菌菌核，粉碎，置于4-8倍體積的60-95%乙醇溶液中浸泡16-24?h（優選的，置于6-7倍體積的70-90%乙醇溶液中浸泡18-20?h，更加優選的，置于6.5倍體積的80%乙醇溶液中浸泡20?h），以除去脂肪、部分單（寡）糖及脂溶性色素，殘渣陰涼處風干。

前面所述的方法，優選的方案是，步驟B．熱水浸提制備粗多糖是指，預處理后的殘渣風干后，加10-20倍蒸餾水（v/w），沸水提取1-3?h，?80-120目紗布過濾（優選的，加13-18倍蒸餾水（v/w），沸水提取1.5-2.5h，?85-100目紗布過濾，更加優選的，加15倍蒸餾水（v/w），沸水提取2?h，100目紗布過濾），濾渣重復提取1-3次，合并濾液，濃縮，離心，噴霧干燥得粗多糖。

前面所述的方法，優選的方案是，步驟C．粗多糖酶解是指，將粗多糖加水溶解，加入木瓜蛋白酶，35-45℃反應20-40?min（優選的，36-42℃反應25-35?min，更加優選的，40℃反應30?min），得粗多糖的酶解液。更加優選的，粗多糖加水溶解后配制為0.5-2.0%（w/w）的水溶液（優選的，配制為0.6-1.8%（w/w）的水溶液，更加優選的，配制為1.5%（w/w）的水溶液）。更加優選的，木瓜蛋白酶加入量為粗多糖水溶液的3-5%（w/w）（優選的，加入量為粗多糖水溶液的3.5-4.5%（w/w），更加優選的，加入量為粗多糖水溶液的4.0%（w/w））。