[發明專利]黃蟬素在制備抗腫瘤藥物中的應用

在審

• 申請號: 201410285911.3
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104042608A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 王愛兵
• 申請（專利權）人: 南京慧智靈杰投資管理有限公司
• 主分類號: A61K31/365
• 分類號: A61K31/365;A61P35/00
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技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及黃蟬素在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

黃蟬素(Allamcin)，分子式C₁₃H₁₄O₅，分子量250.25，分子結構為：

黃蟬素具有細胞毒活性，對纖維肉瘤(fibrosarcoma)、黑色素瘤、乳癌、肺癌、結腸癌、KB細胞、P388的ED₅₀(μg/mL)依次為3.1、0.9、0.1、1.2、0.3、0.3和0.2。

黃蟬素來源于夾竹桃科(Apocynaceae)黃蟬Allamanda?neriifolia?Hook.的葉，黃蟬葉主要成分為黃蟬素和黃蟬花辛。

通過文獻檢索，國內尚未見黃蟬素用于制備抗腫瘤藥物。

發明內容

為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，應用黃蟬素制備抗腫瘤藥物。

本發明的技術方案如下：

本發明所述的黃蟬素，其制備方法包括以下步驟：

(1)以黃蟬葉為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持3-5min后，過40目篩備用；

(2)原料按照料液比1∶4-6(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5％的纖維素酶，在超聲功率500-700W、45-60℃條件下酶解60-90min，得到酶解原料；

(3)將酶解原料投入加入閃式提取器中，加入提取溶劑，進行閃式提取，過濾得到提取液，濃縮干燥得到粗提物；

(4)將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統梯度洗脫，收集黃蟬素流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶；

(5)將粗晶用乙酸乙酯重結晶得到黃蟬素結晶。

所述步驟(2)中乙醇水溶液體積百分比為70-80％。

所述步驟(2)中提取溶劑為70-85％的乙醇溶液。

所述步驟(3)中閃式提取電壓為150V，提取時間為3-5min。

所述步驟(4)中高壓硅膠柱層析，硅膠目數為200目，耐壓35MPa，柱內徑為250mm，層析柱徑高比為1∶10。

所述步驟(4)中氯仿-甲醇的體積比為1∶1-1∶13。

黃蟬素在制備抗腫瘤藥物中的應用。

通過體外腫瘤細胞體外抑制試驗，觀察黃蟬素的抗腫瘤作用，結果表明黃蟬素對A-549肺癌和HCT-8結腸癌均有一定的抑制作用，具有顯著抗癌活性，且其毒副作用小。

本發明的有益效果通過以下實驗得到了驗證：

實驗方法：

1、受試提取物：黃蟬素提取物

(1)性狀：結晶，味苦。

(2)規格：含黃蟬素≥90％。

(3)溶劑：乙醇或甲醇。

(4)儲存條件：4℃，密封保存。

2、細胞株：肺癌細胞株A-549、結腸癌細胞株HCT-8。

3、給藥劑量和方法

黃蟬素組：10mg/kg/天，灌胃給藥，隔一天一次，共五天。

陰性對照組：10mg/kg/天，生理鹽水肌注給藥，隔一天一次，共五天。

陽性對照組：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注給藥，隔一天一次，共五天。

灌胃后2h，用HPLC檢測血漿藥物濃度。

4、種植瘤模型的建立與給藥

(1)皮下種植：分別將上述細胞培養至90％融合，收集細胞，取2×10⁶細胞懸液，注射至小鼠肋下皮下組織，于術后15天取材，稱量瘤重。另取同樣模型，觀察30天，計算藥物對模型動物存活率的影響。

(2)肺內種植瘤肺轉移模型：取2×10⁶細胞懸液注射至小鼠肺包膜內，于術后15天取肺，測量瘤重和肺轉移數。

(3)給藥方式：種植瘤細胞同時給藥。

5、結果

結果如表1、表2和表3顯示，黃蟬素組用藥均有不同程度的抑制腫瘤生長和轉移的作用，可延長實驗小鼠的生存期。

表1黃蟬素對種植瘤的抑制作用

表2黃蟬素對腫瘤轉移發生率的影響(n＝20，％)

表3黃蟬素對實驗小鼠生存率的影響(n＝20，％)