[發(fā)明專利]攜帶EB病毒核抗原1的重組腺病毒疫苗及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410285165.8
• 申請(qǐng)日: 2014-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104162153A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾毅;杜海軍;仝艷艷;周玲;王湛;張麗霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): A61K39/245
• 分類號(hào): A61K39/245;A61K48/00;A61P31/22;A61P35/00;C12N15/861;C12N7/01;C12N5/0783
• 代理公司: 北京富天文博興知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疫苗制備領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及攜帶攜帶EB病毒核抗原1疫苗。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及經(jīng)所述的攜帶EB病毒核抗原1的重組腺病毒疫苗以及與其他疫苗聯(lián)合應(yīng)用。

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背景技術(shù)

世界衛(wèi)生組織下屬的國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)提供的新數(shù)據(jù)顯示，2012年全球新增約1410萬(wàn)例惡性腫瘤病例，死亡人數(shù)達(dá)820萬(wàn)。鼻咽癌(Nasopharyngeal?carcinoma，NPC)在各種惡性腫瘤中具有獨(dú)特的流行病學(xué)特征，在世界上大多數(shù)國(guó)家很罕見(jiàn)，發(fā)病率在1/100?000以下。而在我國(guó)南方很常見(jiàn)，嚴(yán)重危害人民的生命和健康，尤其是我國(guó)的廣東、廣西一些地區(qū)；大部分鼻咽癌發(fā)生在45~54歲年齡組，嚴(yán)重影響勞動(dòng)力健康。鼻咽癌發(fā)病率在腫瘤中位于第一、二位，被稱為“廣東癌”。

鼻咽癌是一種起源于鼻咽部上皮組織的常見(jiàn)惡性腫瘤。目前，放射治療是鼻咽癌首選的治療方案，按照分層綜合治療原則，多數(shù)早期病例采用單純放射治療，少數(shù)放射敏感性差的腫瘤和晚期病例可加輔助化療或增敏劑等，以提高療效。但中晚期鼻咽癌治療后常常復(fù)發(fā)或向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對(duì)于該類患者在臨床上尚無(wú)有效治療方案。

EB病毒和鼻咽癌密切相關(guān)，而且有一致性。EB病毒抗體，尤其是IgA/VCA抗體，在鼻咽癌患者中明顯高于對(duì)照組；腫瘤存在與消退與抗體滴度呈正相關(guān)，而與患者所在地理位置和種族差別無(wú)關(guān)；在未分化和高分化的鼻咽癌中能恒定地發(fā)現(xiàn)EB病毒基因組和EB病毒相關(guān)抗原；EB病毒含有能使B淋巴細(xì)胞、猴腎和人類上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化和不斷增殖的基因；咽部正常細(xì)胞膜和鼻咽癌細(xì)胞均有EB病毒受體的存在。雖然病毒能進(jìn)入咽部正常上皮細(xì)胞內(nèi)，而且腫瘤中也存在病毒基因組，但病毒在鼻咽癌發(fā)生中的作用機(jī)制還未被證實(shí)。

病毒在活體內(nèi)的感染是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，包括病毒的潛伏、活化、轉(zhuǎn)化復(fù)制等。鼻咽癌患者的腫瘤組織以及外周血淋巴細(xì)胞中存在著EB病毒潛伏感染。在已分化和未分化上皮細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)EB病毒基因組和潛伏基因產(chǎn)物；所有鼻咽癌都表達(dá)EB病毒編碼的潛伏蛋白和EBNA1。EB病毒所表達(dá)的潛伏抗原中，LMP1被認(rèn)為在鼻咽癌發(fā)生中起關(guān)鍵性作用，它可以誘發(fā)細(xì)胞增生并影響細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制，被認(rèn)為是EB病毒的一個(gè)致癌基因。NPC患者的血清中存在EBV特異性的IgA/VCA抗體，在NPC組織中存在EBV核酸和基因的表達(dá)。在NPC患者血清中發(fā)現(xiàn)了EBV?DNA?的增殖。這些結(jié)果引導(dǎo)人們將EB病毒基因作為EBV相關(guān)腫瘤的特異性免疫靶抗原。

EB病毒主要通過(guò)唾液傳播，世界上大多數(shù)人都感染了EB病毒，一旦感染終身攜帶。但多數(shù)人安然無(wú)恙，僅有少數(shù)個(gè)體發(fā)展成為NPC，顯然EBV特異性細(xì)胞免疫在控制病毒、防止腫瘤發(fā)生中起到了重要的作用。同時(shí)有特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic?T?lymphocyte，CTL），它控制EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞，這種特異性的細(xì)胞免疫是受HLA所限制的。并發(fā)現(xiàn)具有這種特異活性的T細(xì)胞識(shí)別表位。近年來(lái)，經(jīng)過(guò)研究和詳細(xì)分析已證明LMP1、LMP2均能誘發(fā)特異性CTL反應(yīng)。細(xì)胞免疫在對(duì)病毒活化的“監(jiān)視”和清除轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞中起著關(guān)鍵性作用。

NPC細(xì)胞的EBV抗原表達(dá)主要局限在EBNA1和LMP1、LMP2上。LMP1作為EBV重要的致瘤蛋白，在許多EBV相關(guān)疾病中扮演重要的角色，是EB病毒細(xì)胞免疫反應(yīng)的刺激劑和靶抗原，尤其是N段的蛋白區(qū)域，提供了EB病毒誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞毒性殺傷反應(yīng)的靶抗原，在早前就有證實(shí)LMP1蛋白序列中有特異性CTL識(shí)別表位，具有激發(fā)細(xì)胞免疫的能力，但該基因具有潛在的致癌性。LMP2也是在NPC等EBV相關(guān)腫瘤中持續(xù)表達(dá)的病毒蛋白之一。LMP2不引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，無(wú)致癌性。并且LMP2蛋白序列中存在多個(gè)可被人CTL識(shí)別的抗原表位，不同的人HLA分型識(shí)別不同的抗原表位，而且LMP2也能刺激轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞系的CTL反應(yīng)。國(guó)際上已經(jīng)用LMP2作為治療性疫苗，用于NPC的臨床試驗(yàn)。我們科室構(gòu)建的包含該基因的重組腺病毒疫苗已經(jīng)完成臨床Ⅰ期試驗(yàn)，并申報(bào)臨床Ⅱ、Ⅲ期試驗(yàn)。構(gòu)建的痘苗病毒疫苗，正處于臨床前的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)階段。

EBNA1蛋白中包含一段甘氨酸-丙氨酸重復(fù)區(qū)(Gly-Ala?repeat?region)，具有阻止EBNA1全長(zhǎng)蛋白的降解，抑制其遞呈給CD8⁺T細(xì)胞的作用，這種潛在的免疫抑制作用限制了其在EBV相關(guān)腫瘤免疫治療中的應(yīng)用，尤其限制了伯爾基特淋巴瘤（Burkitt?lymphoma，BL）的CTL治療。