[發明專利]一種含有熒光和/或放射性核素的血清特異活性蛋白酶檢測納米試劑盒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410284858.5
• 申請日: 2014-06-24
• 公開（公告）號: CN104020287A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 朱高紅;周樸臣;王紅旺;史蒂芬博斯曼
• 申請（專利權）人: 朱高紅
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/574
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠

技術領域

本發明屬于材料、生物和分析化學交叉學科技術領域，具體涉及一種含有熒光和/或放射性核素的血清特異活性蛋白酶檢測納米試劑盒及其制備方法與應用。

背景技術

磁性納米粒子之所以具有廣闊的應用前景，是因為它具有許多不同于常規材料的獨特效應，如量子尺寸效應、表面效應、小尺寸效應及宏觀量子隧道效應等，這些效應使磁性納米粒子具有不同于常規材料的光、電、聲、熱、磁、敏感特性。

當磁性納米粒子的粒徑小于其超順磁性臨界尺寸時，粒子進入超順磁性狀態，無矯頑力和剩磁。眾所周知，對于塊狀磁性材料（如Fe、Co、Ni），其體內往往形成多疇結構以降低體系的退磁場能。納米粒子尺寸處于單疇臨界尺寸時具有高的矯頑力。小尺寸效應和表面效應導致磁性納米粒子具有較低的居里溫度。另外，磁性納米粒子的飽和磁化強度（Ms）比常規材料低，并且其比飽和磁化強度隨粒徑的減小而減小。當粒子尺寸降低到納米量級時，磁性材料甚至會發生磁性相變。當上述納米粒子應用到活的生物體內時，未受保護的納米粒子顯示完全腐蝕性。因此，開發一種能解決上述問題的耐生物性侵蝕的磁性納米粒子是非常必要的，可以更進一步推進磁性納米粒子的應用前景。

腫瘤的發生、發展和轉移是一個高度復雜而有序的過程，且受多步驟具有降解作用的酶的級聯反應所調節。據報道5種內肽酶(基質金屬蛋白酶(matrix?metalloproteinases,MMPs)、絲氨酸蛋白酶[尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type?plasminogen?activator，uPA)]、天冬氨酸蛋白酶、蘇氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶)可能與動物和人類腫瘤的進展相關；而基質金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶和組織蛋白酶(Cathepsin)等蛋白酶是腫瘤發生發展所必須的，是目前在腫瘤研究中最為熱門的蛋白酶。

基質金屬蛋白酶MMPs能降解細胞外基質(ECM)和基底膜組織(BM)，參與許多病理生理過程，且與腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移以及腫瘤血管生成等事件密切相關。MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障，在腫瘤侵襲轉移中起關鍵性作用，從而在腫瘤浸潤轉移中的作用日益受到重視，被認為是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP1～MMP26。根據作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，即膠原酶、明膠酶、基質降解素、基質溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。?

uPA具有促進腫瘤發生發展、浸潤轉移的作用，研究表明uPA在膠質瘤、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、胃癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中表達升高。

組織蛋白酶包括半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶（組織蛋白酶D、E）和絲氨酸蛋白酶（組織蛋白酶A、G）。根據其底物特異性分類，組織蛋白酶又包括肽鏈內切酶-組織蛋白酶B、F、H、K、L、S、V，肽鏈端解酶-組織蛋白酶B、C、H、X，氨基肽酶-組織蛋白酶C、H，羧肽酶-組織蛋白酶B、X。人類和動物的腫瘤中如胃癌、膀胱癌、結腸癌、神經膠質瘤、黑色素瘤等都發現Cat-B表達水平和/或活性升高。曾有報道在宮頸癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等惡性腫瘤組織Cat-B表達及其活性成倍甚至3-9?倍高于鄰近正常組織。Ueda等認為Cat-B活性、濃度增高是移行性細胞癌變病人腫瘤侵襲、轉移以及預后較差的一個危險因子。除Cat-B之外，其他許多組織蛋白酶也與腫瘤關系密切。如Cat-D與卵巢癌、黑色素瘤，尤其是乳腺癌的浸潤、轉移有關，?認為它可以作為乳腺癌的預后標志。Cat-L可以通過催化降解基質膜，?促進腫瘤的侵襲、轉移，已經在腎癌、睪丸癌、肺非小細胞癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、膀胱癌和甲狀腺癌等多種癌癥中發現組織蛋白酶L高表達等。

實踐證明，早期發現并診斷腫瘤轉移和預測腫瘤轉移的風險，進而采取行之有效的預防治療措施非常重要，即便是沒有臨床轉移灶的部分早期癌癥，術后輔助化療也能延長患者的無瘤生存期。所以，除了尋求可靠的預后及預測因子來評估腫瘤患者的復發、轉移風險，以便制定合理的治療手段和方案，避免治療不足和過度治療以外，設計和表征靈敏特異快速準確的檢測方法，為制定個體化治療方案提供新的判斷思路顯得更為重要。為此，技術人員開發了多種適合于腫瘤早起診斷的檢測腫瘤生物標志物蛋白酶的方法：比如，免疫組化分析技術（Immunohistochemical，IHC）和酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked?Immuno?Sorbent?Assay，ELISA）。