[發(fā)明專利]一種己烯雌酚快速檢測(cè)卡

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410284470.5
• 申請(qǐng)日: 2014-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104034905A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李永鋒;陳國(guó)勇;傅汝毅;陶玲云;藍(lán)文苑
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西博士海意信息科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李珊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種己烯雌酚快速檢測(cè)卡，是一種檢測(cè)己烯雌酚的檢測(cè)器具，屬于農(nóng)產(chǎn)品違禁物質(zhì)的檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

天然雌激素主要包括雌二醇、雌酮、雌三醇，而合成雌激素主要有己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚等，在農(nóng)業(yè)中主要用作口服避孕藥和家畜生長(zhǎng)的同化激素，通過(guò)增強(qiáng)食欲、抑制發(fā)情、提高飼料轉(zhuǎn)化率和控制性別等作用，能達(dá)到大幅度地提高動(dòng)物養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益的目的，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中雌激素污染殘留呈上升趨勢(shì)。農(nóng)產(chǎn)品中的雌激素可以通過(guò)擾亂內(nèi)分泌、免疫、神經(jīng)等系統(tǒng)的正常功能而對(duì)動(dòng)物和人產(chǎn)生多種疾病，最主要表現(xiàn)在對(duì)生殖系統(tǒng)的影響：女性多出現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤，卵巢癌、乳腺癌等疾病。男性多出現(xiàn)睪丸癌、前列腺癌、精子的數(shù)量與質(zhì)量下降等癥狀。

外源雌激素在環(huán)境及農(nóng)產(chǎn)品中含量很少(動(dòng)物肌肉組織中類固醇激素以ng·kg-1到μg·kg-1數(shù)量級(jí)存在)，加上本身化學(xué)性質(zhì)差異較大以及內(nèi)源性雌激素的影響，因此對(duì)檢測(cè)方法的靈敏度要求較高。目前用于農(nóng)產(chǎn)品中性激素檢測(cè)的方法主要包括儀器分析法、生物活性法和免疫分析法。

儀器分析法主要包括氣相色譜法、高效液相色譜法以及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，已被廣泛用于雌激素類等的測(cè)定。儀器分析法靈敏度高，能較準(zhǔn)確地定性定量，是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證的標(biāo)準(zhǔn)方法。但該方法儀器成本較高，分析時(shí)間較長(zhǎng)、操作較復(fù)雜，因此只適合實(shí)驗(yàn)室確證用，并不適合基層普查使用。免疫層析技術(shù)具有成本低、速度快，特異性高等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于傳染病診斷、生殖生育監(jiān)測(cè)、藥物濫用等領(lǐng)域。雖然免疫層析具有如此吸引人的優(yōu)點(diǎn)，但其應(yīng)用也受到了一定限制，主要是因?yàn)槟壳霸诿庖邔游鲋袘?yīng)用的主要標(biāo)記物是膠體金，一般通過(guò)肉眼觀察進(jìn)行判斷結(jié)果，因此靈敏度不夠高，也無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。因此對(duì)環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品中含量很低的雌激素己烯雌酚測(cè)定來(lái)說(shuō)，普通的膠體金免疫層析很難達(dá)到靈敏度及定量的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能檢測(cè)己烯雌酚的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方法檢測(cè)樣品中己烯雌酚的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測(cè)的操作繁瑣等缺點(diǎn)，建立基于免疫學(xué)特異性的高靈敏度的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種己烯雌酚快速檢測(cè)卡，其為在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼中設(shè)置測(cè)試條，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔和加樣孔；測(cè)試條是由支承背板上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊、熒光素顆粒膜、硝酸纖維素膜、和吸水膜所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端疊置粘貼吸水膜，另一端疊置粘貼樣品墊，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段熒光素顆粒膜；熒光素顆粒膜為含抗己烯雌酚抗體熒光素顆粒和熒光素顆粒標(biāo)記的抗肌動(dòng)蛋白抗體包被的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是：含己烯雌酚蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶，含肌動(dòng)蛋白質(zhì)控帶，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。

采用上述己烯雌酚快速檢測(cè)卡，檢測(cè)樣品為環(huán)境及農(nóng)產(chǎn)品等，處理方法如下：

產(chǎn)品樣品粉碎后加入適量的甲基叔丁基醚，垂直振蕩15min，于4℃、10000rpm離心15min，取上清，氮?dú)獯蹈桑褂煤?0%甲醇的PBS緩沖液溶解，混勻即得待測(cè)樣品。

熒光素顆粒選自異硫氰酸熒光素顆粒、四甲基異硫氰酸羅丹明顆粒、四乙基羅丹明顆粒或藻紅蛋白顆粒。

在樣品吸收墊上滴加樣品，如果樣品中有己烯雌酚，則己烯雌酚經(jīng)層析作用移動(dòng)到熒光素顆粒膜的時(shí)候就會(huì)和熒光素顆粒標(biāo)記的抗己烯雌酚抗體結(jié)合形成復(fù)合物，并帶動(dòng)熒光素顆粒標(biāo)記的質(zhì)控抗體一起在層析作用下上行。當(dāng)移動(dòng)到檢測(cè)帶時(shí)，未被樣品中己烯雌酚結(jié)合的游離的熒光素顆粒標(biāo)記的抗己烯雌酚抗體就會(huì)和檢測(cè)帶上的偶聯(lián)在載體蛋白上的己烯雌酚結(jié)合，而有熒光信號(hào)。熒光素標(biāo)記的質(zhì)控抗體則被質(zhì)控帶上的質(zhì)控抗原捕獲，而有熒光信號(hào)。而樣品中己烯雌酚和熒光素標(biāo)記的抗雌激素抗體形成的復(fù)合物則被層析到吸水紙上。樣品中的己烯雌酚越多，則熒光素顆粒膜中剩余游離的熒光素標(biāo)記的抗雌激素抗體越少，結(jié)合到檢測(cè)帶上的熒光素標(biāo)記的抗雌激素抗體越少，熒光信號(hào)也就越弱，依此來(lái)檢測(cè)樣品中的己烯雌酚的含量。

本發(fā)明的檢測(cè)雌激素的試紙具有靈敏度高、精確定量、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)單方便和檢測(cè)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。由于以熒光素代替了膠體金作為標(biāo)記物，很少的熒光信號(hào)既可以通過(guò)儀器檢測(cè)出來(lái)，因此大大提高了檢測(cè)的靈敏度，檢測(cè)雌激素靈敏度可達(dá)0.1ng/ml。通過(guò)設(shè)置質(zhì)控帶(點(diǎn))作為數(shù)據(jù)歸一化方法，降低了不同紙條間不同操作人員乃至不同儀器掃描的實(shí)驗(yàn)誤差，將不同紙條測(cè)得的樣品值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可以達(dá)到精確定量的效果。

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