[發(fā)明專利]一種體外誘導記憶性B細胞轉化為漿細胞的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410284437.2
• 申請日: 2014-06-24
• 公開（公告）號: CN104031880A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 陳廷濤;辛洪波;魏強
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 南昌市平凡知識產權代理事務所 36122
• 代理人: 夏材祥

1.一種體外誘導記憶性B細胞轉化為漿細胞的制備方法，其特征是：

（1）?飼養(yǎng)細胞的制備與保存：采集人的新鮮抗凝血，用淋巴細胞分離液分離出人的外周血淋巴細胞，經過⁶⁰Co輻照后使人外周血淋巴細胞喪失增殖能力，從而作為人記憶性B細胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細胞；

（2）?誘導液的配置：按加入成分占終產物的質量體積比或體積百分比加入如下成分：2.5μg/mL的CpG2006，10ng/mL的IL-2，10ng/mL的IL-10,?體積百分比25%的B95-8細胞培養(yǎng)上清，體積百分比10%的胎牛血清，將以上成分加入到RPMI-1640培養(yǎng)基中，混勻；

（3）?記憶性B細胞的誘導：將新鮮肝素鈉抗凝全血樣本用人淋巴細胞分離液分離，獲得人外周血單個核細胞，再用人記憶性B細胞磁珠分選試劑盒分離獲得記憶性B細胞，計數后，按照200細胞/孔的密度接種到96孔U型底培養(yǎng)板，每孔加入200mL的培養(yǎng)液和50000個飼養(yǎng)細胞，在37℃,5%CO₂條件下培養(yǎng)兩周，讓記憶性B細胞活化成為漿細胞；

（4.）漿細胞陽性孔的篩選：收集步驟（3）中的細胞培養(yǎng)上清，使用呼吸道合胞病毒抗原G蛋白和F蛋白包被的酶標板，采用酶聯免疫吸附測定方法檢測B細胞上清特異性，看是否分泌所需蛋白。